[发明专利]利用毛细管电泳技术快速鉴别单花蜂蜜的方法

说明书

本发明公开了一种利用毛细管电泳技术快速鉴别单花蜂蜜的方法，本发明利用毛细管电泳技术对蜂蜜中的蛋白质进行分析，利用不同蜂蜜中蛋白质含量及种类的区别对蜂蜜进行真实性鉴定，具有方法简便、效率高及鉴定结果准确等特点，在实现蜂蜜真伪鉴别中具有广泛的应用前景。该方法的步骤如下：(1)对蜂蜜样品加入样品缓冲液进行预处理，常温反应1小时后，10000rpm离心5min，上层清液即为样品。(2)将样品进行毛细管区带电泳，建立各单花蜂蜜的毛细管电泳指纹图谱。(3)对指纹图谱进行化学计量学分析，实现单花蜂蜜的鉴别。(4)此法对枣花蜂蜜、荆条蜂蜜、枸杞蜂蜜的最低检测限为5％，对洋槐蜂蜜的最低检测限为10％。

技术领域

本发明属于食品质量安全领域，具体涉及一种利用毛细管电泳技术快速鉴别单花蜂蜜的 方法。

背景技术

蜂蜜是指蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成 的天然甜味物质。单花蜜是蜜蜂采集单一植物花蜜酿造成的蜂蜜，其口感、营养价值、生理 功效以及养殖成本均在杂花蜜之上。不法商人为了谋取利益，常以廉价杂花蜜来代替单花蜜。 目前，单花蜂蜜真实性鉴别日益成为国内外食品安全领域学者的研究热点。

蜂蜜真伪的传统鉴别方法有感官鉴别、理化指标鉴别等，现代鉴别方法包括近红外光谱 法、拉曼光谱法、气相色谱法、质谱法、高效液相色谱法、同位素色谱法等波谱、色谱方法。 目前这些方法大多利用蜂蜜中含量较高的糖、多酚等物质进行鉴别，这些物质掺假成本低， 易于掺假，不能从根源上避免蜂蜜参杂使假，同时，普遍存在预处理步骤复杂、检测速度慢、 灵敏度、精确度不高等问题，因此，亟待建立一种快速、简便、高效的单花蜂蜜检测方法， 有效规范蜂蜜市场。

发明内容

针对上述问题，本发明根据蜂蜜中溯源性的、不易人工掺假的大分子物质--蛋白质的含 量及种类的差异，建立了一种利用毛细管电泳技术快速鉴别单花蜂蜜的方法，能快速、准确 地实现单花蜂蜜的鉴别。

一种利用毛细管电泳快速鉴别单花蜂蜜的方法，包括以下步骤：

1、毛细管预处理：对于首次使用的毛细管，按以下顺序洗脱：H₂O 20min-1M H₃PO₄溶液 30min-H₂O 20min-1M NaOH 30min-H₂O 10min-运行缓冲液10min。进样前，按以下顺序洗脱：H₂O 2min-1M H₃PO₄溶液2min-H₂O 3min-1M NaOH 2min-H₂O 2min-运行缓冲 液3min。实验过程中，需按以下顺序洗脱：H₂O 5min-运行缓冲液5min。若出现基线不稳 的情况，可加酸或加碱进行冲洗。

1、称取5g蜂蜜，加入5mL样品缓冲液，混匀，常温反应1小时后，10000rpm离心5min，上清液即为样品。

2、将样品进行毛细管区带电泳。

(1)毛细管选用未涂层石英毛细管柱，内径为75μm，检测波长为214nm，进样方式为压力 进样，压力为0.5psi，进样时间为5s，分离电压为5kv，毛细管柱温为25℃。

(2)电泳时，运行缓冲液为含0.5mmol/L十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，pH9，浓度为 50mmol/L磷酸盐缓冲液。

3、利用中药色谱指纹图谱软件2004A建立各蜂蜜的毛细管电泳指纹图谱。

4、对指纹图谱进行化学计量学分析，实现单花蜂蜜的鉴别。

5、确认此方法的检测限。配制杂花蜂蜜，用此法进行检测，确认此法对单花蜂蜜的检测限。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：