[发明专利]溪荪组培苗60Co-γ射线辐射诱变育种方法

权利要求书

1.一种溪荪组培苗⁶⁰Co-γ射线辐射诱变育种方法，其特征是：该方法包括如下步骤：

1)组培苗的选择：选择增殖培养阶段长势优良的组培瓶苗作为辐射材料；

2)⁶⁰Co-γ射线辐射处理：⁶⁰Co-γ射线辐射处理剂量分别为20Gy、30Gy、40Gy、50Gy，分别对不同组培苗辐射后得到不同剂量辐射处理后组培苗组，记作不同剂量辐射实验组；以未进行⁶⁰Co-γ射线辐射处理的溪荪组培苗作为对照组；

3)组培苗突变体初选：选取辐射后不同剂量辐射实验组中存活的组，记作存活实验组；将存活实验组和对照组的植株性状进行比较，从所述存活组中筛选叶片大小、形状、颜色和侧芽数量等性状中至少有一种性状与所述对照组有差异的组培苗，记作初选突变体；

4)初选突变体继代增殖培养：将溪荪初选突变体组培苗和对照组组培苗转接于MS+6BA2.0+KT1.0+NAA0.1培养基上培养4-6周；所述培养基构成为：基本培养基(MS)，附加2.0mg/L 6-苄胺基嘌呤(6-BA)、1.0mg/L激动素(KT)和0.1mg/L萘乙酸(NAA),每个外植体萌发出4-8个小侧芽；切取新长出的侧芽，去1/2叶片后插入增殖培养基中，若需大量繁殖，可进行重复增殖培养；培养室内温度为22-25℃，光照12小时/天，黑暗12小时/天，光照强度为1800-2000勒克斯(Lux)；

5)初选突变体生根培养：当溪荪初选突变体组培苗和对照组组培苗长到2-4cm高度时，即转入生根培养基中，生根培养基构成为：1/2MS+NAA0.2+活性炭，培养适宜温度为23-25℃，光照12小时/天，黑暗12小时/天，光照强度为1800-2000勒克斯(Lux)，培养1-2周，生根培养基(1/2MS+NAA0.2+活性炭)中加入活性炭，提供局部黑暗环境，可缩短生根时间；

6)初选突变体组培苗驯化移栽：待生根培养基中苗根长为0.5-1.0cm，将所述步骤5)的突变体生根苗和步骤5)的对照组生根苗的培养瓶封口膜打开1/2，打开1/2瓶口的生根苗在培养室内驯化1-2天后，撤去封口膜1天，移栽至装好已消毒珍珠岩的苗盘中，浇透水，置于室温20-25℃、空气相对湿度50-80％的室内环境，10天后扎根，约30天进行田间种植；

7)田间种苗突变体筛选：将步骤6)的初选突变体移栽苗与步骤6)的对照组移栽苗的田间性状进行比较，筛选植株叶片大小、叶状、叶色、侧芽数量、花色、花径、花朵形态、株高等性状中至少一种性状与对照组种苗有差异的辐射移栽苗，即为目标突变体；

8)扦插繁殖、组培繁殖和人工选择：在田间观测初选突变体移栽苗和对照组移栽苗在叶片、花朵、株高、侧芽数量等性状上的差异，筛选出观赏价值、应用价值高的突变体，利用扦插、组培等无性繁殖方式进行种苗扩繁，田间种植后观测其突变性状的稳定性，经过2次以上无性繁殖并栽培后，其性状未发生改变的即为诱变新品种。

2.根据权利要求1所述的一种溪荪组培苗⁶⁰Co-γ射线辐射诱变育种方法，其特征是：所述的对溪荪组培瓶苗进行⁶⁰Co-γ射线辐射处理，辐射剂量为20Gy、30Gy、40Gy、50Gy，辐射剂量率为5Gy/h；初步筛选组培苗突变体，通过组培繁殖的继代培养扩繁辐射苗，通过生根培养，驯化移栽时间为30天，在田间从叶、花、植株等性状与未辐射苗进行比较，筛选突变体，突变体经两次无性繁殖栽培后变异性状稳定的即为新品种；组培繁殖使用的基本培养基(MS)，包括大量元素、微量元素、有机物和铁盐，大量元素由质量-体积浓度为1900mg/L的硝酸钾(KNO₃)、440mg/L的氯化钙(CaCl₂·2H₂O)、370mg/L的硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)、1650mg/L的硝酸铵(NH₄NO₃)、170mg/L的磷酸二氢钾(KH₂PO₄·H₂O)组成，微量元素由质量-体积浓度为22.3mg/L的硫酸锰(MnSO₄·4H₂O)、6.2mg/L的硼酸(H₃BO₃)、8.6mg/L的硫酸锌(ZnSO4·7H2O)、0.25mg/L的钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)、0.025mg/L的硫酸铜(CuSO4·5H2O)、0.025mg/L的氯化钴(CoCl₂·6H₂O)、0.83mg/L的碘化钾(KI)组成，有机物由质量-体积浓度为0.5mg/L的烟酸、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.4mg/L的盐酸硫胺素、2mg/L的甘氨酸、100mg/L的肌醇组成，铁盐由质量-体积浓度为27.8mg/L的硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)和37.3mg/L的乙二胺四乙酸二钠(Na₂·EDTA·2H₂O)加热螯合组成混合液，蔗糖质量-体积浓度30g/L，琼脂粉质量-体积浓度5g/L，pH值为5.8～6.0；所述的生根培养基1/2MS为基本培养基MS中的大量元素减半。