[发明专利]使用HPLC法分析检测盐酸依匹斯汀颗粒剂中杂质D的方法

权利要求书

1.一种使用HPLC法分析检测盐酸依匹斯汀颗粒中杂质D的方法，包括采用VP-ODS-C₁₈色谱柱，柱温范围25～35℃；以pH为3.8～4.2的缓冲溶液和甲醇按体积比为85:15～95:5为流动相A，甲醇为流动相B，流动相的流速为0.9～1.1ml/min ；洗脱程序为A：B=95：5～30：70；用紫外检测器进行检测，检测波长为208～212nm，记录色谱图，完成供试品溶液中杂质D的测定。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：采用梯度洗脱法，所述梯度洗脱为：0分钟，流动相A为90%，流动相B为10%；0至20分钟，流动相A为70%，流动相B为30%；20至35分钟，流动相A为60%，流动相B为40%；35至55分钟，流动相A为30%，流动相B为70%；55至65分钟，流动相A为90%，流动相B为10%。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述缓冲溶液为4.0g磷酸二氢钾和3.8g戊烷磺酸钠加水1000mL溶解，再用0.45um滤膜抽滤，然后再加入0.1%（V/V）三乙胺，用磷酸调pH为3.8～4.2制得。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液采用以下步骤制得：取盐酸依匹斯汀颗粒剂样品，用50%甲醇水溶液溶解，配制供试品溶液。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液采用以下步骤制得：称取供试品粉末0.5～0.55g（约相当于盐酸依匹斯汀5mg～5.5 mg），精密称定，置10ml容量瓶中，加适量50%甲醇水溶液超声使溶解，最后用溶剂定容至刻度，摇匀，用孔径为0.45μm的有机系滤头滤过，摇匀，即得。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述紫外检测器的检测波长为210、215、220或230nm。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述紫外检测器的检测波长为210 nm。

8.一种使用HPLC法分析检测盐酸依匹斯汀颗粒中杂质D的方法，其特征在于：包括如下步骤

(1)色谱条件：

色谱柱：SHIMADZU VP-ODS 250mm×4.6mm,5um；捕集柱：岛津Chost trap DS 7.6×30mm柱温：25～35℃；流速：0.9～1.1ml/min；紫外检测器波长：208～212nm；进样量：10μl；

流动相A：磷酸盐缓冲液-甲醇＝85：15；

流动相B：甲醇；

梯度洗脱：0分钟，流动相A为90％，流动相B为10％；0至20分钟，流动相A为70％，流动相B为30％；20至35分钟，流动相A为60％，流动相B为40％；35至55分钟，流动相A为30％，流动相B为70％；55至65分钟，流动相A为90％，流动相B为10％；

(2)流动相溶液的制备：

磷酸盐缓冲液的制备：准确称取磷酸二氢钾4.0g和戊烷磺酸钠3.8g，加水1000ml使溶解，再用0.45um滤膜抽滤，然后再加入0.1％(V/V)三乙胺，用磷酸调pH为3.8～4.2，即得；

流动相A：将磷酸盐缓冲液和甲醇按体积比为85:15的比例混合均匀，过滤，脱气即得；

(3)空白辅料溶液配制：

取空白辅料0.5g，精密称定，置10ml容量瓶中，加适量溶剂(50％甲醇水溶液)超声使溶解，最后用溶剂定容至刻度，摇匀，用孔径为0.45μm的有机系滤头滤过，摇匀，即得；

(4)供试品溶液的制备：

称取供试品粉末0.5g(约相当于盐酸依匹斯汀5mg)，精密称定，置10ml容量瓶中，加适量溶剂(50％甲醇水溶液)超声使溶解，最后用溶剂定容至刻度，摇匀，用孔径为0.45μm的有机系滤头滤过，摇匀，即得；

(5)自身对照溶液制备：

精密量取供试品溶液续滤液1.0ml，置100ml容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀即得；

(6)杂质D溶液制备：

精密称取杂质D20mg，置100ml容量瓶中，用适量溶剂(50％甲醇水溶液)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质D贮备液；精密量取1ml贮备液置100ml容量瓶中，用适量溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；

(7)系统适应性溶液的配制

取供试样品0.5g，置10ml容量瓶中，加杂质D溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

(8)测定方法

取空白溶剂、空白辅料、系统适应性溶液、对照溶液和供试品溶液各10μl 注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使对照溶液中主成分峰的峰高为满量程的15％～25％，记录色谱图；

(9)计算公式：

其中：A_杂质——待测样品中各有关物质的杂质峰面积，

A_对照——对照溶液中盐酸依匹斯汀的峰面积，

V——对照溶液稀释倍数，

F——校正因子，F＝1.69：

(10)结果判断：

杂质D不得大于对照主峰峰面积的0.4倍(0.4％)，要求杂质D与相邻杂质分离度不得小于2.0。