[发明专利]高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化花榈木叶提取物中具抗抑郁作用的化合物的方法

说明书

一种高速逆流色谱‑制备型液相色谱分离纯化花榈木叶提取物中具抗抑郁作用的化合物的方法，是以水：正丁醇：甲基叔丁基醚：乙醇：冰乙酸＝6：3：1：1：0.001(v/v)作为高速逆流溶剂体系，对花榈木叶提取物进行高速逆流色谱分离，共收集到6个流分，其中流分2、流分3分别为2个纯度为98％的单体化合物，将其他流分浓缩后分别通过制备型液相色谱进一步纯化，获得6个纯度为98％以上的化合物。本方法简便，重现性好，可用于化合物大量制备，为阐明花榈木叶提取物抗抑郁作用奠定基础。

技术领域

本发明涉及一种对花榈木叶提取物进行分离纯化的方法，具体涉及一种以高速逆流色谱结合制备型液相色谱从花榈木叶提取物中对具有抗抑郁作用的黄酮类化合物(8个化学成分)进行分离纯化的方法。

背景技术

花榈木属于豆科蝶形花亚科红豆属植物，广泛分布于安徽、浙江、江西、湖北、湖南、广东、四川、贵州和云南等地。花榈木木材为高档家具、雕刻和珍贵装饰品的树种，也是一种中药材，据《全国中草药汇编》中记载，它的根、茎、皮、叶等树体各器官均可入药，用于跌打损伤、腰肌劳损、风湿关节痛、产后血瘀疼痛、白带。我们前期动物实验研究表明，花榈木叶提取物具有良好的抗抑郁作用研究，本专利建立了该提取物中8个化学成分制备方法，并进行了结构鉴定，为进一步药理研究及开发利用奠定基础。

发明内容

本发明的目的是，在前期花榈木叶提取物具有良好的抗抑郁作用研究的基础上，进一步提供一种高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化花榈木叶提取物中具抗抑郁作用的化合物的方法，以获取8个具抗抑郁作用的单体化合物。

为达上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化花榈木叶提取物中具抗抑郁作用的化合物的方法，该方法步骤如下：

(1)以水、正丁醇、甲基叔丁基醚、乙醇和冰乙酸作为溶剂体系，体积比为6：3：1：1：0.001，采用高速逆流色谱法分离花榈木叶提取物，分别收集163-195min、210-225min、238-262min、282-295min、325-365min、427-518min的流出液，将210-225min的流出液和238-262min的流出液分别浓缩后冷冻干燥，分别得化合物2″-O-鼠李糖基牡荆素和2″-O-鼠李糖基异牡荆素；

(2)将上述收集的剩余时间段的流出液分别浓缩，按制备液相色谱条件：色谱柱为Unitary C18柱，流动相为乙腈和0.2％冰乙酸水，采用制备型液相色谱法对浓缩后的流出液进行二次分离，按色谱峰分别接收流出液，将各流出液浓缩后冷冻干燥，分别得到单体化合物2″-O-鼠李糖基异荭草素、异荭草素、荭草素、异牡荆素、香叶木苷和蒙花苷。

上述高速逆流色谱法中溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相，流速为2mL/min，转速为850转/分钟，柱温箱的温度为20℃，检测波长为340nm，固定相的保留率为40％。

上述制备型液相色谱法中流速为6mL/min，检测波长为340nm。

上述步骤(2)中提及的将上述收集的剩余时间段的流出液分别浓缩中的浓缩是指将流出液浓缩至2-5ml。

上述提及的浓缩后冷冻干燥中，浓缩是指于50-55℃下真空旋转蒸发浓缩，冷冻干燥是于冷冻干燥机中干燥24h。

上述提及的花榈木叶提取物的制备请参见申请号为201811413966.2(CN109200084A)的申请。

本方法简便，重现性好，一次上样量最高可达250mg，此时可获得2.45mg化合物1、1.23mg化合物2、3.16mg化合物3、15.13mg化合物4、18.48mg化合物5、1.12mg化合物6、0.69mg化合物7、1.41mg化合物8，纯度均大于98％，可用于化合物大量制备，为阐明花榈木叶提取物抗抑郁作用奠定基础。

附图说明

图1是本发明花榈木叶提取物HPLC检测谱图(检测波长340nm)。