[发明专利]高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化花榈木叶提取物中具抗抑郁作用的化合物的方法

权利要求书

1.一种高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，该方法步骤如下：

(1)以水、正丁醇、甲基叔丁基醚、乙醇和冰乙酸作为溶剂体系，体积比为6：3：1：1：0.001，采用高速逆流色谱法分离花榈木叶提取物，分别收集163-195min、210-225min、238-262min、282-295min、325-365min、427-518min的流出液，将210-225min的流出液和238-262min的流出液分别浓缩后冷冻干燥，得化合物2″-O-鼠李糖基牡荆素和2″-O-鼠李糖基异牡荆素；

(2)将上述收集的剩余时间段的流出液分别浓缩，按制备液相色谱条件：色谱柱为Unitary C18柱，流动相为乙腈和0.2％冰乙酸水，采用制备型液相色谱法对浓缩后的流出液进行二次分离，按色谱峰分别接收流出组分，将各流出组分浓缩后冷冻干燥，分别得到单体化合物2″-O-鼠李糖基异荭草素、异荭草素、荭草素、异牡荆素、香叶木苷和蒙花苷；

其中，上述花榈木叶提取物是取干燥的花榈木叶，粉碎，按1g花榈木叶加10-15mL质量浓度为70％的乙醇的比例，于粉碎的花榈木叶中加入乙醇，超声提取后减压回收乙醇，得水溶液；于水溶液中加入石油醚进行萃取，至醚层无色，弃去石油醚层，水层调pH为2.5-3.5，上AB-8大孔吸附树脂的层析柱，上样完毕后静置30min，先用水洗脱至流出液无色，然后用质量浓度为70％的乙醇洗脱，收集洗脱液；将洗脱液于减压回收乙醇，冷冻干燥，即得。

2.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱法中溶剂体系的上相为固定相，下相为流动相。

3.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱法中流速为2mL/min。

4.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱法中转速为850转/分钟。

5.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱法中柱温箱的温度为20℃。

6.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱法中固定相的保留率为40％。

7.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述制备型液相色谱法中流速为6mL/min。

8.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述高速逆流色谱法和制备型液相色谱法中检测波长为340nm。

9.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(2)中浓缩后冷冻干燥中的浓缩是指于50-55℃下真空旋转蒸发浓缩。

10.如权利要求1所述的高速逆流色谱-制备型液相色谱分离纯化具抗抑郁作用的花榈木叶提取物的方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(2)中的冷冻干燥是指于冷冻干燥机中干燥24h。