[发明专利]检测细胞的组合物及检测方法

说明书

一种检测细胞的组合物，包括5’端具有巯基的多聚核苷酸，附着于多聚核苷酸的金属银，而形成多聚核苷酸‑Ag纳米簇；与多聚核苷酸结合的第一抗体，用于与目标细胞结合，将多聚核苷酸‑Ag纳米簇固定于目标细胞上；偶联于磁性颗粒的第二抗体，用于与目标细胞结合；寡聚核苷酸，其于溶液中时，附着于金属纳米颗粒表面。本发明的检测组合物，采用单链的多聚核苷酸和单链的寡聚核苷酸相组合，利用不同金属的光电特性，建立光谱吸收峰与目标细胞之间的关联性，实现对样本中目标细胞进行定性和定量检测。

技术领域

本发明涉及一种对样本中细胞进行定性和定量检测的方法，特别涉及一种利用金属颗粒具有的光特性，对样本中的细胞实施定性和定量检测的方法和组合物。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一类具有自我更新、多向分化潜能和低免疫原性的干细胞。相关研究表明，MSCs可通过直接接触和旁分泌作用发挥免疫调节性能，从而抑制过度的免疫反应，维持局部微环境稳态，促进组织的修复，为炎症相关性疾病和自身免疫性疾病的治疗带来新的方向。而间充质干细胞的的灵敏检测可以为这些疾病的临床诊断和治疗提供许多重要的信息。

金纳米颗粒因其独特的物理、化学性质以及极低的毒性在生命科学领域备受关注。1997年，Mirkin等人初次报道了金纳米颗粒可由于彼此之间距离的差异而引起不同的颜色变化。近年来，基于金纳米颗粒聚集与否作为信号输出的相关裸眼比色检测展现了其便捷、快捷等优点。与此同时，国内外研究者通过将DNA和纳米材料相结合，合成精确高效的纳米复合物，构建出多种新颖便捷的生物传感策略。常见的DNA组装金纳米复合物往往是通过Au-S键实现稳定结合，然而，由于灵敏度不足等原因，该方法在临床应用方面受到了限制。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种组合物，含有金属粒子，其在波长620nm下具有吸收峰的特性，用于对细胞实施定性检测。

本发明的另一个目的在于提供一种组合物，含有金属粒子，其在波长620nm下具有吸收峰的特性，且细胞浓度的对数值与620nm和520nm处的紫外吸收值之比(A620/A520)具有呈良好的线性关系，用于对细胞实施定量检测。

本发明的再一个目的在于提供一种检测细胞的方法，实现对样本中目标细胞的定性检测。

本发明的又一个目的在于提供一种检测细胞的方法，实现对样本中目标细胞的定量检测。

本领域技术人员可以理解，抗原和抗体系免疫学上对两种分子的表述，本发明中应理解为是一对能够互相特异性结合的分子，具有识别性。

本发明所称的抗原是类似于在肌体中引起特异性(免疫)应答的物质。抗原进入机体后，可刺激肌体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。抗原的反应性取决于抗原决定簇(antigenic determinant)，亦称表位(epitope)。一个抗原分子可带有不同的决定簇。此外，通过基因工程或化学连接的方式对表位进行拼接所取得分子形式，也包含与本发明所称抗原的范围内。

本发明所称的抗体，应当理解为具有识别抗原并与抗原结合的分子，尤其是聚合物，常见的抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。本发明中，抗体还包括具有识别抗原作用的分子，如：但不限于由Ig衍生而来的抗体Fab段、单链抗体、单域抗体和纳米抗体等也应属于此范畴。

本发明的目标细胞，系对样本中含有的拟检测的细胞总称，比如：体细胞、干细胞和癌细胞等。

一种组合物，包括：

多聚核苷酸，其5’端具有巯基；

金属银，其附着于多聚核苷酸，形成多聚核苷酸-Ag纳米簇；