[发明专利]一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺

说明书

本发明涉及一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白提纯方法，旨在解决现有牛血清白蛋白生产工艺较复杂且产品纯度不高的技术难题。本发明建立了一步色谱层析技术，建立了从购买的低纯度牛血清白蛋白原料经过阴离子交换层析、超滤凝缩、冷冻干燥得到纯度为99.5％的产品。本发明工艺步骤少，流程短,操作简单,利于工业化生产且产品纯度高。

技术领域

本发明涉及白蛋白的制备方法,具体涉及一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺。

背景技术

白蛋白(Albumin)是一类能溶于水中、仅在高盐浓度下才能沉淀的蛋白质，又称清蛋白。它是血清(或血浆)含量中最为丰富的蛋白质，约占其总蛋白质含量的55-63％。由于其在脊椎动物血浆中含量最丰富且又极易纯化，在过去30年的时间里，它也是血浆中所有蛋白质中被研究的最早和最为清楚的一种。其中人的血清白蛋白(human serum albumin,HAS)以及牛的血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的氨基酸序列已于1975年获得。

工业生产白蛋白仍以冷乙醇沉淀的工艺为主。工艺相对繁琐，纯度只能到达97％左右，血浆资源并不能得到很好的利用。目前关于白蛋白的层析工艺大多都是以阴离子交换和阳离子交换的方式，周期较长，耗费大量缓冲液。

发明内容

为解决现有技术问题，本发明提供了一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白的纯化工艺。

为实现上述目的,本发明是通过以下技术方案实现的一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白提纯方法,包括以下步骤：

一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺，包括以下步骤：

(1)上样样品的制备

称取5～10g牛血清白蛋白原料，溶于800～100ml 20～50mM NaAc+HAc中，调至pH4～9；

(2)缓冲液的配制：配制3～4L平衡缓冲液A:10～20mMNaAc+HA2～4L洗脱缓冲液B:20～30mMNaAc+HAc 5～10L洗脱缓冲液C：3～10MNaCl 2～4L；

(3)平衡与上样：在层析柱内装入填料，装好层析柱后用平衡液A平衡，流速为2～45ml/min，平衡约3～9个柱体积后，开始上样。继续用A液淋洗，淋洗至检测线平缓；

(4)洗脱：用B液进行洗脱，收集洗脱峰并确定目标峰。紫外吸收降低至基线之后停止收峰，改用C液清洗柱子。最后用去离子水冲洗柱子，在将柱子保存在乙醇中。

(5)置换与浓缩：用20～80kD 100～300cm²膜包将收集到的蛋白溶液进行浓缩与置换。

(6)冷冻干燥为晶体状干粉。

而且，所述步骤(1)中，配成牛血清白蛋白的浓度为10～20mg/ml。

而且，所述步骤(2)中，配制平衡缓冲液A的pH为2～6。

而且，所述步骤(2)中，配制平衡缓冲液B的pH为2～6。

而且，所述步骤(4)中，将柱子保存在20％～50％乙醇中。

而且，所述膜包为超滤膜的物理改性膜,通过将膜浸入丙烯酸溶液,形成吸附以阻止牛血清白蛋白在膜面的污染。

而且，改性方法为：将PS膜放入辐照管中，加入5-25wt％浓度的丙烯酸单体的水溶液，该溶液中含有0.02mol/L CuSO₄，辐照管经冷冻真空脱氧，充氮密封后放入Co-60r辐照室中，将膜浸泡在1mol/l NaOH水溶液中(40℃)10h以上，以除去残留的均聚物。

而且，所述层析柱的填料的制备方法为：