[发明专利]一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺

权利要求书

1.一种适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺，其特征在于：包括以下步骤：

⑴上样样品的制备

称取5~10 g牛血清白蛋白原料，溶于800~100ml 20~50mM NaAc+HAc中，调至pH4~9；

⑵缓冲液的配制：配制3~4L平衡缓冲液A:10~20mMNaAc+HA2~4L洗脱缓冲液B :20~30mMNaAc+HAc5~10L洗脱缓冲液C：3~10MNaCl2~4L；

⑶平衡与上样：在层析柱内装入填料，装好层析柱后用平衡液A平衡，流速为2~45ml/min，平衡3~9个柱体积后，开始上样，继续用A液淋洗，淋洗至检测线平缓；

⑷洗脱：用B液进行洗脱，收集洗脱峰并确定目标峰，紫外吸收降低至基线之后停止收峰，改用C液清洗柱子，最后用去离子水冲洗柱子，在将柱子保存在乙醇中；

⑸置换与浓缩：用20~80kD100~300cm²膜包将收集到的蛋白溶液进行浓缩与置换；

⑹冷冻干燥为晶体状干粉；

所述膜包为超滤膜的物理改性膜,通过将膜浸入丙烯酸溶液,形成吸附以阻止牛血清白蛋白在膜面的污染；

所述层析柱内的层析填料的制备方法为：将Bestarose 4FF琼脂糖凝胶基质用二甲亚砜水溶液、烯丙基溴、氢氧化钠进行活化，然后用N-溴代丁二酰亚胺与丙酮的水溶液进行溴代醇化，将溴代活化的基质氨基活化并进行洗涤，将活化后的基质中加入DMF，HATU，DIPEA进行反应，并将得到的介质进行洗涤，洗涤后加入乙酸钠和乙酸酐的混合液中反应，反应后即为所需填料；

所述膜包的改性方法为：将PS膜放入辐照管中，加入5-25wt%浓度的丙烯酸单体的水溶液，该溶液中含有0.02mol/L CuSO₄，辐照管经冷冻真空脱氧，充氮密封后放入Co-60r辐照室中，将膜浸泡在1mol/L NaOH水溶液中10h以上，水温40℃，以除去残留的均聚物。

2.根据权利要求1所述适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺，其特征在于：所述步骤⑴中，配成牛血清白蛋白的浓度为10~20mg/ml。

3.根据权利要求1所述适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺，其特征在于：所述步骤⑵中，配制平衡缓冲液A 的pH为2~6。

4.根据权利要求1所述适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺，其特征在于：所述步骤⑵中，配制平衡缓冲液B 的pH为2~6。

5.根据权利要求1所述适合中试量产的高纯度牛血清白蛋白纯化工艺，其特征在于：所述步骤⑷中，将柱子保存在20%~50%乙醇中。