[发明专利]采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法

说明书

本发明涉及分析化学技术领域，尤其是采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法。该方法的步骤为：(1)取神经酸标准品，配制多份标准品溶液；(2)将配制好的所有标准品溶液分别上样于高效液相色谱，得到各份标准品溶液对应的色谱图；(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得线性回归方程；(4)取含有神经酸的待测样品，得到待测样品的色谱图，求得待测样品中神经酸的含量。本发明选择乙腈作为溶解和提取溶剂，在保证主要成分被全部提取出来的基础上，除去了其他成分对含量测定的干扰。接着选择特定比例的流动相对待测物进行洗脱分离，实现了神经酸样品的简便快速定量，免去了常规方法酯化繁琐的操作和待测组分的损失。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，尤其是采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法。

背景技术

神经酸化学名为顺-15-二十四碳单烯酸，分子式为C₂₄H₄₆O₂，相对分子量为366.6。在常温下，神经酸为白色片状晶体，能溶于醇，不溶于水，熔点为39～40℃。神经酸是一种ω-9型长链单不饱和脂肪酸，又名鲨鱼酸，最早发现存在于鲨鱼脑中，是神经组织生物膜的重要组成成分以及脑甙中髓质的标志性成分，也是世界公认的具有修复疏通受损大脑神经通路、恢复神经末梢活性、促进神经细胞生长和发育功能的重要物质。人体本身不能合成神经酸，也很难在日常食物中汲取到，只能靠人为补充。神经酸的缺乏会引起脑衰老、免疫功能低下、中枢与周围神经系统疾病：如老年痴呆、脑瘫、脑萎缩、抑郁、记忆力减退、睡眠健忘等脑疾病。

由于神经酸特殊的药理作用，对神经酸原料药及制剂中神经酸的含量测定具有重要价值。然而，目前神经酸含量的测定，多采用衍生化气相色谱法。由于衍生化气相色谱法通常将神经酸进行酯化后测定酯化物的含量，该方法预处理过程烦琐，可能存在未完全反应的神经酸，会对检测结果有一定影响，检测准确度不高。因此，亟待开发一种前处理简便、准确度高的神经酸含量测定方法。

发明内容

为了解决背景技术中描述的技术问题，本发明提供了一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，选择乙腈作为溶解和提取溶剂，在保证主要成分被全部提取出来的基础上，也除去了其他成分对含量测定的干扰。接着选择特定比例的流动相对待测物进行洗脱分离，实现了神经酸样品的简便快速定量，免去了常规方法酯化繁琐的操作和待测组分的损失。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法，包括以下步骤：

(1)取神经酸标准品，以乙腈为溶剂，按照浓度梯度配制多份标准品溶液；

(2)将配制好的所有标准品溶液分别上样于高效液相色谱，采用C8色谱柱，以90％-95％乙腈和余量体积比为0.05％-0.15％的磷酸水溶液为流动相，得到各份标准品溶液对应的色谱图；

(3)以各份标准品溶液的浓度为横坐标，以对应色谱图中神经酸色谱峰的峰面积为纵坐标作图，得线性回归方程；

(4)取含有神经酸的待测样品，加入乙腈超声处理使主成分溶解，得待测样品溶液，上样于高效液相色谱，采用与步骤(2)相同的方法进行检测，得到待测样品的色谱图，将其中神经酸色谱峰的峰面积代入步骤(3)所述线性回归方程中，求得待测样品中神经酸的含量。

具体地，所述待测样品为神经酸原料药及含神经酸的固体制剂。

具体地，所述待测样品溶液的制备方法为：称取待测样品置容量瓶中，加入乙腈，超声处理使主成分溶解，乙腈定容至刻度，摇匀，得待测样品溶液。

具体地，所述待测样品溶液用0.22μm滤膜过滤后，再上样于高效液相色谱。

具体地，步骤(1)中，所述多份标准品溶液的浓度分别为0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL。