[发明专利]一种昆虫肠道微生物DNA的提取方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种昆虫肠道微生物DNA的提取方法。本发明提供的昆虫肠道微生物DNA的提取方法，通过呕吐剂处理昆虫获得昆虫肠道内容物，不涉及到宿主组织研磨和破碎过程，可避免宿主DNA和RNA污染，该方法操作简单、便捷、高效率，可在10min内获取高质量的昆虫幼虫的肠道内容物，与传统普遍方法相比，提取时间节省了12倍。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种昆虫肠道微生物DNA的提取方法。

背景技术

昆虫消化能力强、适应能力广，这和其肠道微生物有密切关系。相关研究表明昆虫肠道中含有大量的纤维素类水解酶，蛋白类水解酶、污染物降解酶等等，如何开发此类酶资源是目前的热点领域。此外，在昆虫的一些科学研究中常常要进行昆虫肠道菌群分析，昆虫肠道基因资源的开发以及相关基因转录热点研究等，因此获取昆虫肠道微生物DNA是满足这些需求的前提。但是昆虫肠道细小，难以从肠道内获取其内容物，而提取高纯度的DNA更是难上加难。现阶段，常采用抽取昆虫肠段的方法获取其肠道内容物，再通过内容物提取DNA，但其操作时间长、过程复杂，而且在操作过程中还可能将宿主DNA或RNA提取出来影响后续的研究。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种简单、便捷、高效率的昆虫肠道微生物DNA的提取方法。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：一种昆虫肠道微生物DNA的提取方法，包括以下步骤：

(1)用乙醇清洗昆虫体表，再使用无菌水进行清洗；

(2)将步骤(1)处理好的昆虫，用呕吐剂和无菌水进行处理，使得昆虫呕吐获得其肠道内容物；

(3)将步骤(2)所得肠道内容物进行离心，并收集含有肠道微生物群的沉淀；

(4)使用试剂盒对步骤(3)所得沉淀进行DNA提取，即获得所述DNA；

(5)对步骤(4)所得的DNA进行浓度和纯度检测。

作为本发明的优选实施方式，所述步骤(2)中，所述呕吐剂的浓度为0.01～1％，所述呕吐剂选自吐温-20、吐温-60、吐温-80、矿物油中的至少一种。

作为本发明的优选实施方式，所述步骤(2)中，所述呕吐剂为吐温-20，所述吐温-20的浓度为0.01～1％。

作为本发明的优选实施方式，所述步骤(3)中，所述肠道内容物的离心速度为600～12000rpm/min，离心时间为5min。

提取昆虫幼虫肠道微生物DNA的普遍方法，一种是直接在昆虫腹部破坏肠道，获得肠道内容物，另一中是传统的肠道微生物提取方法，即从昆虫尾部抽取肠段，然后加入石英砂研磨碎，再然后离心获得肠道内容物，此两种操作中很容易携带大量的宿主组织，导致肠道微生物群DNA中混有大量的宿主DNA或RNA，不利于获取较纯的肠道微生物群DNA。根据本发明的提取昆虫幼虫肠道微生物DNA的方法，加入呕吐剂，获得其内容物，该方法操作简便、快捷、高效，能够获得较高浓度的DNA，同时能够保证肠道微生物群DNA的纯度，将宿主DNA或RNA的污染降低到最小，对后续肠道微生物群的基因组测序研究、基因挖掘等具有重要意义。

作为本发明的优选实施方式，所述昆虫为选自双翅目、鳞翅目、同翅目、直翅目、蜚蠊目、膜翅目、半翅目和鞘翅目昆虫中的至少一种。

作为本发明的优选实施方式，所述昆虫选自双翅目和鞘翅目昆虫中的至少一种。