[发明专利]一种用于鉴定红带锥蝽的分子特异性标记物及分子鉴定方法

权利要求书

1.一种用于鉴定红带锥蝽的分子特异性标记物，其特征在于，所述分子特异性标记物为红带锥蝽Cytb基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2. SEQ ID NO：1所述红带锥蝽Cytb基因在鉴定红带锥蝽/或在制备红带锥蝽鉴定试剂盒中的应用。

3.一种用于鉴定红带锥蝽的特异性扩增引物对，其特征在于，所述引物对包括上游引物F和下游引物R，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：2～3所示。

4.权利要求3所述特异性扩增引物对在鉴定红带锥蝽/或在制备红带锥蝽鉴定试剂盒中的应用。

5.一种红带锥蝽的分子鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取待测样本基因组DNA；

S2.以步骤S1所述基因组DNA为模板，以SEQ ID NO：2～3所示引物对进行PCR扩增；

S3.取适量步骤S2的PCR扩增产物电泳检测，若特异性扩增出大小约为615bp的条带，则对该PCR扩增产物进行测序；

S4.若步骤S3的PCR扩增产物与SEQ ID NO.1的相似性在95%以上，即可判断待测样品为红带锥蝽。

6.根据权利要求5所述的的分子鉴定方法，其特征在于，还包括将GenBank中相似性大于80%的锥蝽Cytb基因序列与步骤S3测序得到的序列进行比对，构建基于红带锥蝽Cytb基因的系统发育树，区分不同属的锥蝽。

7.根据权利要求5所述的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增体系如下：PCR体系50 μL，包括待测样本DNA模板1 μL，1.1× PCR mix 45 μL，10 μmol/L上下游引物各2 μL。

8.根据权利要求5所述的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增程序为：98℃预变性2 min；98 ℃变性10 s，48 ℃退火30 s，72 ℃延伸15 s，循环35次；72 ℃继续延伸3 min，最后反应终止在4 ℃。

9.一种红带锥蝽的分子鉴定试剂盒，其特征在于，包含特异性扩增SEQ ID NO：1所述核苷酸序列的引物对。

10.根据权利要求8所述的分子鉴定试剂盒，其特征在于，所述引物对包括上游引物F和下游引物R，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：2～3所示。