[发明专利]一种同时测定雷公藤中4种有效成分含量的方法

权利要求书

1.一种同时测定雷公藤中4种有效成分含量的方法，其特征在于：是同时对雷公藤中雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤红素和雷公藤酯甲的含量测定，具体含量测定方法包括：

混合对照品溶液的制备：

①精密称取对照品雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤红素、雷公藤酯甲，分别加入甲醇溶解，摇匀，得各对照品储备液；

②精密量取各对照品储备液1mL于10mL容量瓶中，加甲醇并定容至刻度，混合，摇匀，精密量取1mL混合液，稀释成10mL，制备成混合对照品溶液；

供试品溶液的制备：

①称取干燥粉碎后的雷公藤药材，加乙醇回流提取两次，过滤，合并滤液，浓缩至无乙醇味，干燥至恒重；

②精密称取干燥后的残渣于锥形瓶中，加入乙酸乙酯，超声处理，过滤，用乙酸乙酯分次洗涤锥形瓶和漏斗，合并滤液及洗液，旋转蒸发仪回收溶剂，残渣用乙酸乙酯溶解，经过中性氧化铝柱，用乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，回收溶剂；

③步骤②中残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得各供试品溶液；

色谱条件：色谱柱：Thermo Hypersil GOLD Phenyl Dim，250mm×4.6mm，5μm；流动相A：0.1％磷酸溶液-0.2％三乙胺溶液；流动相B：乙腈，梯度洗脱；检测波长：0～65min为225nm，65min时切换为210nm；流速：0.75mL/min；柱温：25℃；进样量：10μL；

测定方法：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液，在上述色谱条件下，分别测量雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤红素、雷公藤酯甲的面积，计算，即得。

2.如权利要求1所述的同时测定雷公藤中4种有效成分含量的方法，其特征在于：所述混合对照品溶液的制备是：

①精密称取对照品雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤红素、雷公藤酯甲各10μl，分别置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得各对照品储备液；

②精密量取各对照品储备液1mL于10mL容量瓶中，加甲醇并定容至刻度，混合，摇匀，精密量取1mL混合液，稀释成10mL，制备成混合对照品溶液。

3.如权利要求1中所述的同时测定雷公藤中4种有效成分含量的方法，其特征在于：所述供试品溶液的制备是：

①雷公藤药材干燥粉碎后过40目筛，精密称取15g，加入95％乙醇，其料液比为1：3，75℃回流提取两次，每次4.5h，过滤，合并滤液，浓缩至无乙醇味，干燥至恒重；

②精密称取干燥后的残渣0.5g于锥形瓶中，加入乙酸乙酯30mL，超声处理30min，超声提取功率为300w，过滤，用30mL乙酸乙酯分次洗涤锥形瓶和漏斗，合并滤液及洗液，旋转蒸发仪回收溶剂，残渣用10mL乙酸乙酯溶解，经过中性氧化铝柱，100～200目，3.5g，内径1cm，乙酸乙酯湿法装柱，用35mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，回收溶剂；

③步骤②中残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得各供试品溶液。

4.如权利要求1中所述的同时测定雷公藤中4种有效成分含量的方法，其特征在于：梯度洗脱时，梯度洗脱程序为：0～10min，20％～35％B；10～15min，35％～40％B；15～35min，40％B；35～50min，40％～45％B；50～60min，40％～45％B；60～75min，65％～75％B。