[发明专利]一种鉴定辛硫磷在淡水鱼不同组织中代谢产物的方法

说明书

本发明公开了一种鉴定辛硫磷在淡水鱼不同组织中代谢产物的方法，采用浸泡法给药，通过超高效液相色谱串联四级杆飞行时间高分辨率质谱（UPLC‑QTOFMS）定性检测辛硫磷在不同组织中的代谢产物，包括以下步骤：（1）淡水鱼在辛硫磷溶液浸泡后采集不同组织；（2）提取样品，提取剂为乙腈和乙酸乙酯以体积比5：1混合，净化剂为无水硫酸镁和十八烷基硅烷键合硅胶以质量比10:1混合；（3）UPLC‑QTOFMS定性分析：与辛硫磷、O,O,O^’,O^’,‑四乙基二硫逐磷酸酯和O,O‑二乙基硫代磷酸的保留时间和离子质量进行比对，判断各组织样品的代谢产物。

技术领域

本发明属于水产养殖技术和检测分析技术领域，具体涉及一种基于超高效液相色谱串联四级杆飞行时间高分辨率质谱定性分析淡水鱼组织中辛硫磷及其代谢产物的方法。

背景技术

辛硫磷(Phoxim)是一种有机磷杀虫剂，当前用作兽药控制猪和绵羊的螨、虱子和其他的体外寄生虫。在我国辛硫磷也被批准用于杀灭或驱除寄生于团头鲂、罗非鱼、草鱼、青鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲤鱼、鲫鱼等淡水鱼体上的中华鳋、锚头鳋、鱼虱、三代虫、指环虫、线虫等寄生虫。如果辛硫磷使用不当，可能造成其在水产动物组织中产生残留，进而危害人体健康。

辛硫磷在大鼠、猪和兔子主要的降解步骤包括磷酸酯键水解和脱烷基，氰基苯甲醛肟(在大鼠和猪进一步脱毒为苯甲酰氨基酯酸，在兔子中降解为苯甲腈)和脱乙基辛硫磷。在老鼠和牛犊，氰基基团氧化是一个降解的重要途径，结合辛硫磷羧酸，辛硫磷的氧化类似物是对高杀虫活性杀虫剂的响应，被发现在苍蝇提取物中而不在哺乳动物中，虽然这个化合物可能短暂出现的中间产物作为脱乙基辛硫磷在大鼠体内暂时被鉴定。辛硫磷在猪体内的代谢：放射性标记的辛硫磷以明胶胶囊的形式按5mg/kg bw的单剂量口灌两头猪。最高放射浓度出现在用药后24h，在脂肪中放射活度最高相当于1320μg/kg，肝脏中相当于600μg/kg，肾脏中相当于350μg/kg，肌肉中相当于50μg/kg，72h时组织中的浓度大约是上述浓度值的一半，组织中仅有辛硫磷和氰基苯甲氰肟能被鉴定，仅有脂肪中的能被定量。在脂肪(有90％的放射性活度)、腰肉和肌肉中发现辛硫磷，在腰肉、肌肉和肝脏中未发现氰基苯甲醛肟。采用放射性标记的辛硫磷作为浇泼剂对七头猪通过皮肤给药，给药剂量为100mg/kgbw，皮肤生物利用度为1.2％～2.9％(European Medicines Agency,2005)。刘荣飞等(2013)采用高效液相色谱串联离子阱质谱仪对鲫鱼体外肝微粒体的代谢产物和代谢途径进行了研究。该研究采用制备鲫鱼肝微粒体的方法，将辛硫磷直接添加到肝微粒体中进行体外孵育。该方法与辛硫磷在鱼体的实际使用情况不同，而且使用的辛硫磷在体外肝微粒体的浓度为100μmol/L(35.796mg/L)这么高的浓度在实际情况中也不并存在，因此辛硫磷在鱼体内的代谢物可能会与体外肝微粒体孵育高浓度的辛硫磷的代谢产物不同。为揭示辛硫磷在鱼体内组织中的代谢产物，本研究按照辛硫磷在鱼类中使用的实际情况来研究辛硫磷在团头鲂血浆、肌肉、皮肤、肝脏、肾脏、鳃、肠等组织中的代谢产物，研究结果更接近实际情况，而且本研究也为制定水产品中辛硫磷的最大残留限量提供科学基础。