[发明专利]一种葫芦的组培快繁方法

说明书

本发明提供了一种葫芦组培快繁方法，涉及植物组织培养技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：1)将去壳的葫芦种子消毒，接种到无菌苗固体培养基表面进行无菌苗培养，得无菌苗；2)剥离所述无菌苗的子叶节，将所述子叶节接种于丛生芽诱导培养基中进行诱导培养，得丛生芽；3)分离所述丛生芽后接种于生根培养基中进行生根培养，得葫芦组培快繁苗。利用本发明所述方法，2个月内获得大量遗传性状一致的葫芦成苗；同时增殖系数最高达2.27，生根率最高达95％。本发明所述方法为葫芦的细胞工程和转基因改良育种提供了方法基础，同时为规模化生产高品质葫芦砧木苗提供参考。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种葫芦的组培快繁方法。

背景技术

植物组织培养是一种快速有效的生物工程育种手段，不受季节和地区的限制。植物组织培养又叫离体培养，无菌条件下分离植物组织和器官，在人工控制的条件下进行离体培养，得到成熟的愈伤组织，经过再分化获得再生完整植株。由细胞全能性可知植物的任何组织和器官在一定条件下都可以长成为完整的植株。但是这些离体组织细胞全能性有许多差异，甚至是同一组织器官的不同部位也不一定相同。除此以外，基因型、苗龄、培养基、培养条件等因素控制或影响植物细胞状态，决定培养的效果和结果。

葫芦(Lagenaria siceraria Standl.)属于双子叶植物纲葫芦科葫芦属，在我国南北各地都有种植，一年生攀援草本植物。它是世界上最古老的作物之一，葫芦的果实、叶子和藤蔓在成熟前可作蔬菜使用，具有消肿利尿，清热解暑作用；成熟后的果实表皮木质化严重变得坚硬，可作装饰和容器使用；此外中医发现葫芦可用来治疗黄疸，润肺止咳。现代农业生产中，葫芦被广泛应用于西瓜、南瓜、黄瓜等瓜类蔬菜作物的嫁接砧木，嫁接苗可以提高接穗的抗虫抗病性，保质保产。嫁接技术发展越来越成熟，葫芦砧木普及应用，砧木的抗性强弱直接影响果实的品质。运用生物工程技术培育高抗优良的葫芦新品种是瓜类蔬菜生产的发展方向。然而常规传统育种方式周期长，无法维持优良性状代代稳定遗传，进程慢，很难满足生产的需求。

到目前为止，葫芦组织培养工作研究欠缺，没有一个完善的离体再生体系，制约着转基因技术在葫芦遗传改良育种方面的应用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种葫芦的组培快繁方法，可以克服常规育种繁琐周期长效率低的缺点，为葫芦的细胞工程和转基因改良育种提供了方法基础；且操作简单，生产成本低，应用价值高，出苗多又快，为规模化生产高品质葫芦砧木苗提供参考。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种葫芦的组培快繁方法，包括以下步骤：1)将去壳的葫芦种子消毒，接种到无菌苗固体培养基中进行无菌苗培养，得无菌苗；所述无菌苗固体培养基以MS培养基为基本培养基，还包括以下质量百分比的组分：0.4～0.8％的琼脂和2～4％的蔗糖，pH值为5.8；所述无菌苗培养包括暗培养2～4d后转入光照培养；

2)剥离所述无菌苗的子叶节，将所述子叶节接种于丛生芽诱导培养基中进行诱导培养，得丛生芽；所述丛生芽诱导培养基以MS为基本培养基，还包括：1～4mg/L的6-BA、0.1～0.4mg/L的ZT、分别占所述丛生芽诱导培养基质量0.4～0.8％的琼脂和2～4％的蔗糖，pH值为5.8；

3)分离所述丛生芽后接种于生根培养基中进行生根培养，得葫芦组培快繁苗；所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，还包括：0.1～0.3mg/L的IBA、分别占所述生根培养基质量0.4～0.8％的琼脂和2～4％的蔗糖，pH值为5.8。

优选的，步骤1)所述消毒包括依次进行的第一消毒和第二消毒；所述第一消毒为将所述去壳的葫芦种子用体积分数为70～80％乙醇水溶液浸泡70～90s；所述第二消毒为将第一消毒后的种子用质量分数为8～12％的次氯酸钠水溶液消毒10～15min。