[发明专利]一种[2-D-组氨酸]-醋酸亮丙瑞林的制备方法

说明书

本发明提供一种制备一种[2‑D‑组氨酸]‑醋酸亮丙瑞林的制备方法，包括：(1)固相接肽：通过准备原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步骤，得到亮丙瑞林九肽树脂，其中，接二肽到接九肽的步骤均包括去保护基；而后洗涤、中和、再洗涤、接肽和检测游离氨；(2)胺解：通过乙基胺从上述亮丙瑞林九肽树脂上解离粗品；(3)HPLC纯化：经HPLC制备柱纯化得到醋酸亮丙瑞林中间纯化品；(4)浓缩；(5)过滤、冻干。

技术领域

本发明涉及一种化学合成方法，具体涉及制备[2-D-组氨酸]-醋酸亮丙瑞林的制备方法。

背景技术

目前醋酸亮丙瑞林原料药生产采用制备Boc-Pro--固相接肽-胺解-HPLC纯化-浓缩-过滤冻干工艺或采用制备FMoc-Pro--固相接肽-酸切割-乙胺化修饰-侧链全保护切割-HPLC纯化-浓缩-过滤冻干工艺。其中，固相接肽为通过准备原料、接二肽、接三肽、接四肽、接五肽、接六肽、接七肽、接八肽和接九肽的步骤，得到亮丙瑞林九肽树脂。

在固相接肽过程中，由于发生消旋化等副反应，会产生多种副产物，虽然经过纯化去除副产物，但是依然会有部分残留在最终的成品原料药内。欧盟药典(日本和美国药典也均有描述)可知残留在原料药内已知的有关物质主要包括以下11种：[3-D-色氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[2-D-组氨酸，4-D-丝氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[7-D-亮氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[4-D-丝氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[2-D-组氨酸]-醋酸亮丙瑞林、(5-oxo-D-Proline)]-醋酸亮丙瑞林、[8-[5-N-[imino(1H-pyrazol-1y1)-L-ornithine]]-醋酸亮丙瑞林、[6-L-亮氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[5-D-酪氨酸]-醋酸亮丙瑞林、[4-dehydroalanine]-醋酸亮丙瑞林、[4-(O-acetyl-L-丝氨酸)]-醋酸亮丙瑞林。其中，[2-D-组氨酸]-醋酸亮丙瑞林结构式如下：pGlu-D-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro·NHC₂H₅。

上述每个有关物质除了在成品内的含量必须得到严格控制外，其理化性质、是否对患者产生不良反应以及毒理作用等，也要求尽可能清楚。要想对上述每个有关物质进行深入研究，必须得到足够量、结构正确且高纯度的有关物质就显得尤为重要。

目前得到上述有关物质的途径主要为在对醋酸亮丙瑞林粗品进行纯化时，对微量的有关物质进行收集，此法所得有关物质量少且纯度较低。或者是收集到一定量后，再对其进行纯化得到，此法所得有关物质纯度较高，但是需要富集多批次的粗品才能得到一定量的有关物质，周期长，成本高。上述通过纯化目标肽，得到有关物质的方法受粗品纯度和纯化的分离度影响较大，当粗品内有关物质较少和纯化分离度较低时(例如：相对出峰时间为0.7至0.78的4种有关物质，纯化时被一起去除，相对出峰时间为0.9至1.09的3种有关物质与目标峰相似，难以分离)，难以得到结构明确的所需的有关物质。

目前尚未有合成[2-D-组氨酸]-醋酸亮丙瑞林的相关报道。

发明内容

本专利根据欧盟药典(日本和美国药典也均有描述)对相对出峰时间为0.90，英文字母为B，【[2-D-组氨酸]-醋酸亮丙瑞林】有关物质，提供另一种方法，即用合成法直接合成出粗品，然后再通过HPLC纯化-浓缩-过滤-真空冷冻干燥得到高纯度的目标产物。

本专利提供了【[2-D-组氨酸]-醋酸亮丙瑞林】有关物质的合成方法。本方法为Boc法固相合成方法，通过对反应温度，不同氨基酸使用不同的活化剂、脱BOC保护基试剂的应用，BOC-Pro-树脂中BOC-Pro的取代度的不断改进，不仅克服了Fmoc法生产周期长，成本高的缺点，本发明最大的优点是使副反应最小化，明显提高了BOC法粗品合成产率达到60％以上，同时大大提高了粗品质量，降低了生产成本。

本专利的制备方法，具体为：接肽中，接第四肽和第八肽为D氨基酸、其他为L氨基酸