[发明专利]一种合成2’-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201910093684.7 | 申请日： | 2019-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN109735479B | 公开（公告）日： | 2022-04-01 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;邓洁莹;陈春梅;吕雪芹;李江华;堵国成;陈坚 | 申请（专利权）人： | 光明乳业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;C12P19/12;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京东正专利代理事务所(普通合伙) 11312 | 代理人： | 蔡仲德 |
| 地址： | 201103 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 合成 岩藻糖基 乳糖 重组 枯草 芽孢 杆菌 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种合成2'-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌是通过在枯草芽孢杆菌168的基因组中强化表达乳糖运输酶基因，并表达外源岩藻糖基转移酶、岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因得到的，其中，将P43启动子和乳糖运输酶基因替换枯草芽孢杆菌168的淀粉酶基因amyE位点，所述乳糖运输酶基因是大肠杆菌乳糖运输酶基因lacY。
2.根据权利要求1所述的合成2'-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因来源于脆弱拟杆菌，岩藻糖基转移酶来源于幽门螺旋杆菌。
3.一种权利要求1所述的合成2'-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，该构建方法包括以下步骤：
（1）构建包含淀粉酶基因amyE位点的上下游序列、大肠杆菌乳糖运输酶基因lacY、P43启动子和博来霉素抗性基因序列的替换框，将构建好的替换框转化枯草芽孢杆菌168，通过验证，确认大肠杆菌乳糖运输酶基因lacY强化表达成功，得到重组枯草芽孢杆菌；所述替换框的序列如SEQ ID NO.1所示；
（2）构建包含岩藻糖基转移酶、岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因的重组质粒，将构建好的重组质粒转化步骤（1）的重组枯草芽孢杆菌，通过验证，确认岩藻糖基转移酶、岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶表达成功，得到重组枯草芽孢杆菌。
4.根据权利要求3所述的合成2'-岩藻糖基乳糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，步骤（1）中，将构建好的替换框电转化枯草芽孢杆菌168的感受态细胞，替换框的添加量为100-300ng。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于光明乳业股份有限公司，未经光明乳业股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910093684.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
