[发明专利]一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的检测及验证方法

权利要求书

1.一种银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的整合溶出度的检测方法，包括以下步骤：采用如下方法测定银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度；具体步骤如下：

1)供试品溶液的制备：取银杏酮酯片，加入甲醇水溶液进行超声提取、离心后取上清液，加入甲醇水溶液定容后再稀释，即得供试品溶液；

步骤1)中，所述银杏酮酯片加入的质量mg与甲醇水溶液加入的体积mL之比为80-120：4-6；

2)对照品溶液的制备：将银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的对照品分别加入二甲基亚砜溶解后配成相应的对照品母液，再分别取对照品母液混合后加入甲醇水溶液定容，得到对照品溶液；

3)溶出溶液的制备：取溶出介质，加入银杏酮酯片进行溶出实验后，取样离心后取上清液，再加入溶出介质稀释，即得溶出溶液；

步骤3)中，所述银杏酮酯片加入的质量mg与溶出介质加入的体积mL之比为1440-1560:450-550；

4)检测：采用UPLC-Q-TOF-MS分别测定供试品溶液、对照品溶液及溶出溶液，根据分子质量、保留时间，分别确定供试品溶液和溶出溶液中萜内酯类和黄酮苷类成分，并根据外标法分别确定供试品溶液和溶出溶液中萜内酯类和黄酮苷类成分的含量；

步骤4)中，色谱条件，包括以下条件：

A1)色谱柱为C₁₈色谱柱；

A2)柱温为40-50℃；

A3)流速为0.3-0.5ml/min；

A4)进样量为1-5μL；

A5)流动相为甲酸水-甲醇溶液，其中，A相为甲酸水，B相为甲醇；

A6)洗脱方式为梯度洗脱，分析时间为15min；

所述梯度洗脱程序具体为：

0-10min，A相：B相体积比为98：2-25：75；

10-10.5min，A相：B相体积比为25：75-2：98；

10.5-13min，A相：B相体积比为2：98-2：98；

13-13.5min，A相：B相体积比为2：98-98：2；

13.5-15min，A相：B相体积比为98：2-98：2；

步骤4)中，质谱条件为：扫描模式为负离子条件下Sensitivity模式；扫描时间为14-16min；离子源为ESI源；离子源温度为110-130℃；毛细管电压为2-3kV；脱溶剂气流速为700-900L/h；脱溶剂气温度为300-500℃；锥孔电压为30-40V；萃取电压为3-5V；数据采集模式为MS^E；扫描范围为m/z 40-1500amu；

5)溶出度计算：将供试品溶液与溶出溶液中萜内酯类和黄酮苷类成分的含量，按公式Ⅰ分别计算银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度，所述公式Ⅰ为：溶出度％＝(Ai×V1×m2)/(Bi×V2×m1)×100％；其中，Ai：溶出溶液中各成分的含量，ng/mL；Bi：供试品溶液中各成分的含量，ng/mL；V1：溶出介质体积，mL；V2：供试品溶液体积，mL；m1：溶出溶液中加入银杏酮酯片重量，g；m2：供试品溶液制备时银杏酮酯片重量，g；

所述银杏酮酯片中萜内酯类和黄酮苷类成分包括有银杏内酯B、银杏内酯A、银杏内酯C、白果内酯、芦丁、异槲皮苷、3-O-GLC-异鼠李素、山奈酚-3-O-芸香糖、香蒲新苷；

其特征在于，

A)取银杏酮酯片，根据溶出度的检测方法中步骤3)，于不同溶出时间点进行溶出试验，获得一系列的溶出溶液；

B)将步骤A)获得的一系列的溶出溶液，根据溶出度的检测方法中步骤4)进行测定，获得一系列的溶出溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的含量；

C)将步骤B)获得的一系列的溶出溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的含量，根据溶出度的检测方法中步骤5)进行计算，获得一系列的溶出溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度；

D)根据溶出度的检测方法中步骤4)获得的供试品溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的含量，按公式Ⅱ计算各个萜内酯类和黄酮苷类成分的质量权重系数，所述公式Ⅱ为：ψ＝n/ω，其中，ψ为质量权重系数；ω为成分的总含量，％；n为各成分中任意一个成分的含量，％；

E)将步骤D)获得的供试品溶液中各个萜内酯类和黄酮苷类成分的质量权重系数，与步骤C)获得的一系列的溶出溶液中相应萜内酯类和黄酮苷类成分的溶出度，按公式Ⅲ计算各成分于不同溶出时间点的整合溶出度，所述公式Ⅲ为：

其中，δ为整合溶出度，％；A，B，C…为各成分溶出度，％；ω为成分的总含量，％；i为成分个数，n为各成分的个数集合；abc…为各成分的含量，％。