[发明专利]一种水产品中己烯雌酚残留量的检测方法

说明书

本发明涉及一种水产品中己烯雌酚残留量的检测方法，所述方法包括如下步骤：(1)制备标准试剂；(2)提取待衍生样液：将5.00g匀浆样品置于50mL离心管，加入0.5g无水硫酸镁、8mL乙酸乙酯涡旋混合2min后，于5000r/min离心5min，得到第一待衍生样液；取2mL脱水后的第一待衍生样液于2mL离心管，加入0.2g中性氧化铝，离心后准确移取1mL上清液待衍生，得到第二待衍生样液；(3)试样的衍生化；(4)标准工作溶液的衍生化；(5)计算浓度。本发明的检测方法减少了溶剂的使用量，从而便于批量化检测，且衍生化的结果更佳。

技术领域

本发明涉及激素检测技术领域，特别涉及一种水产品中己烯雌酚残留量的检测方法。

背景技术

随着水产品食品越来越得到大众的喜爱，其安全性检测非常重要。己烯雌酚(Diethylstilbestrol，DES)是一种人工合成的非甾体雌激素，因其具有增加蛋自质沉积和减少脂肪沉积的作用而作为促生长剂广泛应用于养殖业，后经研究发现DES残留对生物体具有刺激性早熟及潜在的致畸致癌等危害，因此动物性食品中己烯雌酚的残留检测问题受到国内外的高度重视。从市场的调查结果可知，尽管大部分国家已经规定在饲料中禁止添加DES，然而受到强大经济利益的驱使，滥用DES现象仍然存在，同时在一些工业废水和生活废水中也存在着DES，在水产品食品中残留的DES仍然威胁着食用者的健康，因此，必须建立方便有效的DES残留检测方法以确保动物性食品的安全。

现有的己烯雌酚残留检测方法主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联机法(GC/MS)、液相色谱-质谱联机法(LC/MS)、放射免疫法(RIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)。中华人民共和国国家标准《畜禽肉中己烯雌酚的测定》(GB/T 5009.108-2003)中采用高效液相色谱法方法，其敏度较高，重复性较好，定量精度较高，但容易受到杂质的干扰，需要用适宜的填料柱，容量小，流动相消耗大；农业部1163号公告-1-2009 《动物性食品中己烯雌酚残留检测酶联免疫吸附测定法》中酶联免疫吸附法检测限及稳定性均达到要求，但DES试剂盒主要依靠国外进口，价格偏高；气相色谱-质谱法虽能获得较低的检测限，但与气相色谱法一样，都必须要进行繁琐的衍生化处理；液相色谱-质谱联机法灵敏度高，检测限低，但价格昂贵，难以在国内基层检测部门普及；放射免疫法由于抗原抗体的特异性反应，存在交叉反应、假阳性反应的结果，组织样品处理较繁琐、需要有同位素防护设备，对操作人员有一定的危害等。可知，己烯雌酚的常规化学分析方法都存在一些不足，而对于目前的检测需求来说，主要的问题在于，溶剂消耗量较大，难以进行批量化处理。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种水产品中己烯雌酚残留量的检测方法，具有溶剂消耗量少、便于批量化检测的优点。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

一种水产品中己烯雌酚残留量的检测方法，所述方法包括如下步骤：

(1)制备标准试剂

称取10mg己烯雌酚，用甲醇定容与10mL容量瓶中，得到浓度为 100mg/L的标准试剂，置于18℃恒温环境中保存；

(2)提取待衍生样液

将5.00g匀浆样品置于50mL离心管，加入0.5g无水硫酸镁、8mL 乙酸乙酯涡旋混合2min后，于5000r/min离心5min，得到第一待衍生样液；取2mL脱水后的第一待衍生样液于2mL离心管，加入0.2g中性氧化铝，离心后准确移取1mL上清液待衍生，得到第二待衍生样液；

(3)试样的衍生化

取1mL第二待衍生样液，氮吹至近干，加入100μL衍生化试剂，密封；于100℃反应0.5h，取出冷却至室温，氮吹至近干，准确加入1mL正己烷，涡旋混合30s，供GC-MS检测分析；

(4)标准工作溶液的衍生化