[发明专利]草鱼insulin基因及含有该基因的重组表达载体、重组菌及其应用

说明书

本发明公开了一种草鱼insulin基因及含有该基因的重组表达载体、重组菌及其在制备草鱼促生长剂或添加剂中的应用，属于基因工程技术领域。本发明首次扩增编码草鱼insulin蛋白的基因，并将该基因构建重组表达载体和大肠杆菌重组菌株，利用大肠杆菌重组菌株在体外获得大量表达的重组草鱼insulin蛋白，该重组草鱼insulin蛋白可用于制备适合草鱼使用的促生长剂或添加剂。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种草鱼insulin基因及含有该基因的重组表达载体、重组菌及其在制备草鱼促生长剂或添加剂中的应用。

背景技术

肝脏作为动物的重要代谢器官，不仅在调节机体的代谢中起着关键的作用，而且对机体的生长也起着重要的调控作用。在机体的代谢调节过程中胰岛素起着重要的调控作用。胰腺一直被认为是胰岛素的重要产生器官，但最近的研究表明胰腺以外的其它器官也能够分泌胰岛素，胰岛素作为重要的激素在机体的生长、细胞分化以及代谢方面发挥重要的功能。鱼类的肝胰脏或布氏体是胰岛素分泌的重要器官，在调节鱼类的摄食、生长、发育和糖脂代谢等多方面都发挥着重要作用。胰岛素与受体结合后能够通过PI3K/Akt、ERK和STAT/Jak-STAT信号通路来引发下游多种的生物学功能。

草鱼属鲤形目，鲤科，草鱼属，因其生长迅速，饲料来源广，是中国淡水养殖的四大家鱼之一。另外草鱼以其肉质细嫩、个体大、肌间刺少而备受消费者喜爱。目前草鱼养殖的饲料还需要大量的动植物蛋白作为主要添加剂，然而动植物蛋白成本较高，如果能够提高草鱼对糖脂的利用，对生产成本会有很大的降低，但目前在草鱼人工养殖中还没有一种能有效促进糖脂利用的饵料添加剂。

发明内容

本发明的目的是提供了一种草鱼insulin基因及含有该基因的重组表达载体、重组菌及其在制备草鱼促生长剂或添加剂中的应用。

本发明为实现上述目的采用如下技术方案，草鱼insulin基因，该草鱼insulin基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明扩增了编码草鱼insulin蛋白的基因。克隆的方法是常规的基因克隆方法，根据已公布草鱼insulin基因序列设计引物，利用草鱼肝胰脏cDNA为模板，经过PCR后得到目的片段，对PCR产物进行回收后，将得到目的基因连接到PCR2.1载体为PCR2.1-insulin。

本发明提供了上述草鱼insulin基因编码的草鱼insulin蛋白，该草鱼insulin蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明提供了含有上述草鱼insulin基因的重组表达载体，该重组表达载体为含有编码草鱼insulin蛋白的大肠杆菌表达载体pET22b-insulin，其通过将带有酶切接头的编码草鱼insulin蛋白的基因经酶切和分离纯化后，接入到大肠杆菌载体表达pET22b的相应酶切位点即EcoRI和NotI之间构建而成。