[发明专利]草鱼insulin基因及含有该基因的重组表达载体、重组菌及其应用

权利要求书

1.草鱼insulin基因，其特征在于：该草鱼insulin基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.权利要求1所述的草鱼insulin基因编码的草鱼insulin蛋白，其特征在于：该草鱼insulin蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.一种含有权利要求1所述的草鱼insulin基因的重组表达载体。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于：该重组表达载体为含有编码草鱼insulin蛋白的大肠杆菌表达载体pET22b-insulin，其通过将带有酶切接头的编码草鱼insulin蛋白的基因经酶切和分离纯化后，接入到大肠杆菌载体表达pET22b的相应酶切位点即EcoRI和NotI之间构建而成。

5.权利要求3或4所述的重组表达载体转化的大肠杆菌重组菌株，其特征在于：该大肠杆菌重组菌株由含有编码草鱼insulin蛋白的大肠杆菌表达载体pET22b-insulin转入大肠杆菌BL21中而形成的大肠杆菌重组菌株pET22b-insulin-BL21。

6.权利要求5所述的大肠杆菌重组菌株在制备重组草鱼insulin蛋白中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于重组草鱼insulin蛋白的具体制备过程为：将大肠杆菌重组菌株接种到LB液体培养基中，37℃，200转/分培养14-16小时，按照体积比1:100接种在500mL LB液体培养基中，37℃，200转/分培养至OD600达到0.5-0.8，然后加入IPTG至终浓度为1mM，37℃，200转/分培养4小时后5000g离心10min收集菌体，超声破碎后12000g离心10min收集上清，经分离纯化得到重组草鱼insulin蛋白。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于所述重组草鱼insulin蛋白的浓缩和脱盐方法的具体过程为：将纯化得到的重组草鱼insulin蛋白加入到超滤管中，4℃，6000g离心1-2小时，使超滤管中蛋白溶液至1mL，去掉滤出液，向超滤管中加入10mL的PBS，反复重复4次，最终得到脱去咪唑的重组草鱼insulin蛋白。

9.权利要求2所述的草鱼insulin蛋白或权利要求6所述的重组草鱼insulin蛋白在制备草鱼促生长剂或添加剂中的应用。