[发明专利]一种S100B蛋白的化学发光法检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明适用于生物技术领域，具体涉及一种S100B蛋白的化学发光法检测试剂盒及其使用方法，所述S100B蛋白的检测试剂盒包括包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、发光液A和发光液B、检测抗体稀释液。本发明实施例提供的试剂盒待测品(标准品或血清样本)与辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液的反应时间为2小时；临床常见的病理性黄疸和脂血症标本对血清S100B蛋白测定未见明显干扰；批内及批间平均变异均小于5.0％，具有简便、快速、特异、敏感，适于临床常规应用的技术效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种S100B蛋白的化学发光法检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

S100B蛋白是一个分子量为21KD的酸性钙结合蛋白。由于其分子量较小，并大量存在中枢神经系统中，在体内发挥着多种生物学功能，因此，它与血脑屏障和脑损伤有着密切的关系。目前，国内外已对S100B蛋白，特别是对其在血清中的动态变化水平在疾病的诊断、预后方面的临床意义方面进行了大量研究。

S100B的检测实际是对S100B亚单位的检测，S100B蛋白检测主要采用免疫学方法，目前主要有放免分析法(RIA)或免疫放射测定法(IRMA)、荧光免疫测定法(FIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)和电化学发光法(ECLIA)，用于检测脑脊液、血液、尿、羊水等中S100B蛋白的含量，从而进行进一步的临床诊断。

放射免疫(RIA)或免疫放射测定法(IRMA)测定的基本原理是标记抗原与未标记待测抗原竞争反应系统中有限抗体上的特异结合位点，其灵敏度为0.2μg/L。但因存在放射污染和危害，核素半衰期短，试剂盒稳定期短，操作繁琐等不足而应用受限。

荧光免疫法(FIA)的基本原理是以荧光色素标记的特异性抗体，与待测抗原结合，测定荧光的强度以计算出标本中抗原的含量。Wiesmann等采用FIA方法，用抗S100B蛋白单抗包被微孔板.与待测抗原及生物素标记兔抗S100B抗体结合.形成双抗体夹心复合物。此法灵敏度较IRMA显著提高，达到0.015μg/L，重复性好，可自动化。但须专门的荧光设备，因此在临床上不易普及。

酶联免疫吸附试验(ELISA)采用原核系统表达的S100B作为标准品并制备抗S100B单克隆抗体，建立的双抗体夹心法，其灵敏度高达0.0125μg/L，线性范围0-3.2μg/L，CV6.9％。ELISA法较RIA、FIA具有灵敏度高、无污染、操作简便、报告结果快速等诸多优点，在临床上具有极大的应用价值。我国已有国产化ELISA试剂，有较好的稳定性和灵敏度。

电化学发光法(ECLIA)是利用链霉亲和素包被的磁珠和生物素化的抗体与S100B抗体连接为一体，形成双抗体夹心，最后通过与抗体偶联的发光剂和电子供体TPA通过氧化还原反应在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强度与发光剂的浓度呈线性关系，故可测出待测抗原的含量。电化学发光法的优点：⑴标记物的再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易于测定；⑵敏感度高，可达pg/mL水平；⑶线性范围宽；⑷反应时间短，20min以内可完成测定；⑸试剂稳定性好，2～5℃可保持一年以上，是目前较为常用的检测方法。与ELISA法相比其主要优势为其反应动力学较ELISA方法更快，并且具有更大的固相结合表面。分析方法的设计与ELISA方法有很多相似处，但在实验设计上却拥有更多的灵活性。

因此，为了满足临床检测需求，更快、更准确的实现对血清中S100B蛋白的定量检测，亟需一种定量测定血清中S100B浓度水平的体外诊断试剂盒，为颅脑损伤和脑血管疾病诊断及预后判断提供帮助。

发明内容

本发明实施例提供一种S100B蛋白的化学发光法检测试剂盒，以满足临床检测需求，更快、更准确的实现对血清中S100B蛋白的定量检测。