[发明专利]一种通用型猪圆环病毒3型巢氏PCR检测引物及方法

权利要求书

1.用于检测猪圆环病毒3型的巢氏PCR引物，其特征在于，所述引物根据检测圆环病毒3型Cap蛋白ORF2基因的高度保守的碱基序列设计两对引物，所述引物为一对外侧引物PCV3-O-F、PCV3-O-R和一对内侧引物PCV3-I-F、PCV3-I-R，其序列为：

PCV3-O-F：5’-GTGTGAGTGGATATACCGGGCAGTG-3’(SEQ ID NO.1)；

PCV3-O-R：5’-ACCCACCCACCCAATAAATAC-3’(SEQ ID NO.2)；

PCV3-I-F：5’-GTGTTTTGATGCCGCAGGAC-3’(SEQ ID NO.3)；

PCV3-I-R：5’-AAGGCCTCCAACTTTCCACGAAT-3’(SEQ ID NO.4)。

2.一种猪圆环病毒3型巢式PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的两对引物、阳性对照和阴性对照，所述阴性对照为RNase-free water，所述阳性对照为含有猪圆环病毒3型1091bp基因片段的重组质粒。

3.一种用于检测猪圆环病毒3型的通用型巢氏PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、从待检测样品提取DNA；

S2、以S1提取的DNA为模板，用权利要求1所述外侧引物进行第一轮PCR扩增，产物进行电泳检测，若无1091bp条带则进行第二轮扩增；

S3、以第一轮扩增产物为模板，用权利要求1所述内侧引物进行第二轮扩增，产物用进行电泳检测。

4.根据权利要求3所述的用于检测猪圆环病毒3型的通用型巢氏PCR检测方法，其特征在于，S1所述待测样品包括猪的血清、脾脏或肺脏。

5.根据权利要求3所述的用于检测猪圆环病毒3型的通用型巢氏PCR检测方法，其特征在于，S2所述PCR反应体系总体积25μL，其中Taq Mix 12.5μL，PCV3-O-F、PCV3-O-R各1μL，模板1μL，ddH₂O余量；反应条件为95℃预变性5min，95℃30s，60℃45s，72℃1min，共32个循环，最后72℃延伸8min。

6.根据权利要求3所述的用于检测猪圆环病毒3型的通用型巢氏PCR检测方法，其特征在于，S3所述PCR反应体系总体积25μL，其中Taq Mix 12.5μL，PCV3-I-F、PCV3-I-R各1μL，模板1μL，ddH2O余量；反应条件为95℃预变性5min，95℃30s，62℃45s，72℃1min，共32个循环，最后72℃延伸8min。