[发明专利]用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用

说明书

本发明涉及一种用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用。通过对ABPA患者的CARD9^S12N位点进行检测，分析其等位基因位点上A所占的百分比，进而评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性。本发明对于APBA的防控及其发病机制进行研究具有重大意义。

技术领域

本发明涉及分子遗传技术领域，特别涉及用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用。

背景技术

变态反应性支气管肺曲霉菌病(Allergic Bronchopulmonary Aspergillosis,ABPA)是肺曲霉菌病的一种，其致病菌为曲霉菌(Aspergillas，Asp)，尤以烟曲霉菌(Aspergillas fumigatus，Af)最为常见。

ABPA的主要免疫应答为Th2介导的细胞免疫应答，Th2细胞能分泌白细胞IL-4、IL-5和IL-13,有助于IgE产生,促进嗜酸粒细胞分化成熟。ABPA典型的病理学特征包括①富含嗜酸性粒细胞的肉芽肿，主要累及支气管和细支气管；②支气管腔内黏液及纤维蛋白分泌增多，黏液栓形成，可见由嗜酸性粒细胞降解产生形成的夏科-雷登晶体，并导致中心性支气管扩张；③支气管及肺组织中有嗜酸性粒细胞、单核细胞的侵润，而周围血管炎较轻。从临床和免疫检查的角度，ABPA的主要特点嗜酸粒细胞增多，肺部大量浸润，血清总IgE水平显著升高以及烟曲霉菌特异的IgE和IgG阳性。本病最常见的临床症状为喘息，急性发作时可由发热、咳嗽、头痛、全身不适、咳白色或粘液泡沫痰，可由金棕色或墨绿色胶冻样痰栓，部分患者出现咳血。慢性期除有肺纤维化导致的呼吸困难、全身乏力和紫绀等症状，还可出现支气管扩张并感染等症状。

然而，目前对于ABPA精确诊断还相当匮乏。同时，对于如何利用分子遗传手段对遗传风险因子进行预测，进而评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性还未曾报道。

发明内容

基于此，有必要提供一种用于检测rs4077515多态性位点的物质在评价或辅助评价ABPA中的应用，以利于APBA的早期防控。

用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质在制备评价或辅助评价待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病危险性的产品或检测系统中的应用。

在其中一实施例中，所述CARD9基因rs4077515多态性位点的基因型表现为AA、AG或GG，当CARD9:g.136372044G>A等位基因位点上A所占的百分比大于65％时，待测个体患变态反应性支气管肺曲霉菌病的危险性相对升高。

在其中一实施例中，所述rs4077515多态性位点为：以RNA反转录得到的cDNA为模板，采用引物扩增得到的扩增产物的编码CARD9蛋白第12位氨基酸的核苷酸，所述引物由序列表1所示的正向引物和序列表2所示的反向引物组成。

在其中一实施例中，用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质为：用于直接测序法的物质、用于焦磷酸测序的物质、用于基因芯片测序的物质、用于二代测序的物质、用于SNaPShot技术测序的物质、用于TaqMan技术测序的物质、用于聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性分析相结合的物质、用于聚合酶链式反应与直接测序法相结合的物质、用于聚合酶链式反应与焦磷酸测序法相结合的物质、用于杂交的方法的物质、用于引物延伸的方法的物质、用于构象方法的物质、或用于高分辨溶解曲线分析的物质。

在其中一实施例中，所述用于检测CARD9基因rs4077515多态性位点的物质为用于焦磷酸测序的物质，包括：引物、反应底物、待测单链和酶；

所述反应底物主要由5′-磷酰硫酸和荧光素组成，所述酶主要由DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶组成。

在其中一实施例中，所述待测个体为哮喘病患者或肺囊性纤维化患者。