[发明专利]产酸克雷伯杆菌的恒温扩增检测方法及其专用引物与试剂盒在审
| 申请号： | 201910067587.0 | 申请日： | 2019-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN109750114A | 公开（公告）日： | 2019-05-14 |
| 发明（设计）人： | 赵进;董德荣;刘运喜;张波;刘一;董志伟 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军空军特色医学中心;中国人民解放军疾病预防控制中心;中国人民解放军总医院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 白艳 |
| 地址： | 100093*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 产酸 杆菌 恒温扩增检测 检测 专用引物 引物BIP 引物FIP 试剂盒 基层医疗卫生单位 环介导等温扩增 等温条件 反应引物 复杂仪器 核酸序列 技术平台 可用 筛查 灵敏 | ||
1.一种鉴定或辅助鉴定产酸克雷伯杆菌的环介导等温扩增成套引物，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LoopF和引物LoopB组成；
所述引物F3为如下(a1)或(a2)：
(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；
所述引物B3为如下(a3)或(a4)：
(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；
所述引物FIP为如下(a5)或(a6)：
(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；
(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；
所述引物BIP为如下(a7)或(a8)：
(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；
(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；
所述引物LoopF如下(a9)或(a10)：
(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；
(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；
所述引物LoopB如下(a11)或(a12)：
(a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；
(a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子。
2.根据权利要求1所述的成套引物，其特征在于：
所述引物F3、所述引物B3、所述引物FIP、所述引物BIP、所述引物LoopF和所述引物LoopB的摩尔比为1:1:8:8:4:4。
3.一种鉴定或辅助鉴定产酸克雷伯杆菌的环介导等温扩增试剂，其包括权利要求1或2所述的成套引物。
4.根据权利要求3所述的PCR试剂，其特征在于：所述试剂还包括DNA聚合酶、dNTP、Tris-HCl、MgSO4、KCl、(NH4)2SO4、甜菜碱和Tween-20。
5.根据权利要求4所述的PCR试剂，其特征在于：所述试剂还包括荧光指示剂；
和/或，所述荧光指示剂具体包括calcein和MnCl2。
6.根据权利要求3-5中任一所述的PCR试剂，其特征在于：
所述引物F3、所述引物B3、所述引物FIP、所述引物BIP、所述引物LoopF和所述引物LoopB的浓度分别为0.2μM、0.2μM、1.6μM、1.6μM、0.8μM和0.8μM。
7.用于检测产酸克雷伯杆菌的环介导等温扩增试剂盒，包括权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3-6中任一所述PCR试剂。
8.权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3-6中任一所述PCR试剂在如下1)或2)或3)中的应用：
1)制备鉴定或辅助鉴定产酸克雷伯杆菌的产品；
2)制备检测或辅助检测待测样本中是否含有产酸克雷伯杆菌的产品；
3)制备检测或辅助检测待测菌是否为产酸克雷伯杆菌的产品。
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