[发明专利]一种甘油-2-α-葡萄糖基化酶在制备2-α-甘油葡萄糖苷中的应用

权利要求书

1.一种甘油-2-α-葡萄糖基化酶在制备2-α-甘油葡萄糖苷中的应用，其特征在于所述甘油-2-α-葡萄糖基化酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述甘油-2-α-葡萄糖基化酶编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：将含甘油-2-α-葡萄糖基化酶基因的重组大肠杆菌经发酵培养获得的发酵液或发酵离心的湿菌体用缓冲液悬浮的菌悬液为催化剂，以甘油为底物，以蔗糖为辅助底物，在30-45℃的条件下进行反应，获得含2-α-甘油葡萄糖苷的反应液，将反应液分离纯化，获得2-α-甘油葡萄糖苷。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液或菌悬液中湿菌体含量为5-100g/L，甘油的终浓度为100-150g/L，蔗糖终浓度为300-400g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于反应pH为6.0-8.0，反应时间为24h。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于缓冲液为pH7.0、2.5mM磷酸缓冲液。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液的摇瓶制备方法：(1)将含甘油-2-α-葡萄糖基化酶基因的重组大肠杆菌接种在含50mg/L卡那霉素的种子培养基中，30-37℃、180-250rpm培养至对数生长中期，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaHPO₄·12H₂O 8.9g/L、KH₂PO₄ 3.4g/L、NH₄Cl 2.67g/L、Na₂SO₄ 0.71g/L、MgSO₄·7H₂O 0.49g/L，溶剂为去离子水，pH6.8-7.0；

(2)发酵培养：将种子液以体积浓度5％的接种量接种到含卡那霉素50mg/L的发酵培养基中，在30-37℃培养4-6h；加入终浓度为18-22g/L的α-乳糖，在22-25℃继续发酵12-18h，取发酵液离心，收集湿菌体细胞；所述发酵培养基质量终浓度组成：酵母粉12g/L、蛋白胨15g/L、甘油10g/L、Na₂HPO₄·12H₂O 8.9g/L、KH₂PO₄ 3.4g/L、NH₄Cl 2.67g/L、Na₂SO₄ 0.71g/L、MgSO₄·7H₂O 0.3g/L，溶剂为去离子水，pH6.8-7.0。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液的发酵罐制备方法：

(1)将含甘油-2-α-葡萄糖基化酶基因的重组大肠杆菌接种在含50mg/L卡那霉素的种子培养基中，30-37℃、180-250rpm培养至对数生长中期，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、NaHPO₄·12H₂O 8.9g/L、KH₂PO₄ 3.4g/L、NH₄Cl 2.67g/L、Na₂SO₄ 0.71g/L、MgSO₄·7H₂O 0.49g/L，溶剂为去离子水，pH6.8-7.0；

(2)发酵培养：将新鲜培养的种子液按照体积浓度5％的接种量，接种到含质量浓度0.05％消泡剂和50mg/L卡那霉素的发酵培养基中，37℃培养4h；加入终浓度为20g/L的α-乳糖，在发酵温度25℃、溶解氧DO大于20％、pH6.8条件下发酵培养，获得发酵液；所述发酵培养基质量终浓度组成：酵母粉12g/L、蛋白胨15g/L、甘油10g/L、Na₂HPO₄·12H₂O 8.9g/L、KH₂PO₄ 3.4g/L、NH₄Cl 2.67g/L、Na₂SO₄ 0.71g/L、MgSO₄·7H₂O 0.3g/L，溶剂为去离子水，pH6.8-7.0。