[发明专利]一种双酶分步酶解制备人参多肽的方法

说明书

本发明的一种双酶分步酶解制备人参多肽的方法，属于酶解植物蛋白制备多肽的技术领域。是以人参粉末为原料，经过制备人参蛋白粗提液、制备人参总蛋白、双酶酶解的过程制取人参多肽；所述的双酶酶解，选择酶活力为20U/mg的风味蛋白酶酶和酶活力为200U/mg的碱性蛋白酶按等量混合酶解4～6h，或按等量分先后用碱性蛋白酶酶解4～6h、风味蛋白酶酶解20h。本发明方法合理，工艺简单，易于操作，不必反复调节pH和温度，酶解效果明显，多肽纯度高，收率高损失少；所提取的人参多肽安全性好，在食品、药品、保健品、化妆品等领域具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于双酶分步酶解植物蛋白制备多肽的技术领域，特别涉及人参多肽的制备方法。

背景技术

人参(Panax ginseng C.A.Mey)被誉为“百草之王”，是中国东北地区道地药材，具有滋阴补生，扶正固本的功效，是海内外认可的滋补养生佳品。有记载以来，《神农本草经》最早描述了人参的药理作用：主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，明目，开心益智。人参营养成分主要有氨基酸、蛋白质、糖类、挥发油、核苷酸、黄酮、人参皂苷、有机酸、维生素、甾醇类和无机元素。现代医学研究表明，人参皂苷作为主要活性成分，广泛参与中枢神经系统、应激与性功能以及受体和信号传导功能。

近年来研究表明人参蛋白具有多种生物学活性。李霞等人(“人参水溶性蛋白活性研究进展”，中国实用医药，5(27)，2010年)报道了人参蛋白增强免疫的作用，如促进某些细胞增殖、抑制肿瘤细胞增殖、抗病毒和抗细菌等功能。徐云凤等人(“人参蛋白对小鼠的耐缺氧及抗氧化作用”，食品科技，37(03)，2012年)报道了人参蛋白对小鼠耐缺氧能力具有显著增强作用,对D-半乳糖造模小鼠有一定的抗氧化作用。李红艳等人(“人参蛋白对β淀粉样蛋白_1-40和H₂O₂损伤神经元的保护作用及其机制”，吉林大学学报(医学版)，39(06)，2013年)报道了人参蛋白神经保护的作用，其作用机制与减少NOS活性、降低NO水平、抑制神经元凋亡有关。

在人参蛋白研究基础上，进一步发现人参多肽的生物学作用。王本祥等人(“人参多肽降血糖作用”，药学学报，25(6)，1990年)报道了人参多肽具有降低正常血糖和肝糖原,但对总血脂无明显影响,对肾上腺、四氧嘧啶及葡萄糖所引起的高血糖均有抑制作用,并能增强肾上腺素对肝糖原的分解的功效。Mara Colzani等人(“The secrets of Orientalpanacea:Panax ginseng”,Journal of Proteomics，Volume 130,1 January 2016,Pages150-159)报道了用胃蛋白酶和肠酶连续水解来模拟蛋白质的生理酶促消化，证实了人参蛋白质组中的多种活性肽的生物学活性。李红艳等人(“人参总蛋白的酶解及氨基酸含量测定”，中国现代中药，18(01)，2016年)报道了人参蛋白采用胃蛋白酶、胰蛋白酶及双酶(胃蛋白酶与胰蛋白酶联合)酶解后，转变为多肽及少量氨基酸，且氨基酸种类变化不大,含量明显减少。结论是人参蛋白在体内发挥作用的最终活性物质是多肽。

多肽通常由10～100个氨基酸分子脱水缩合而成，其分子量介于1.1KDa～11KDa。近期科学家认为人参蛋白主要是以多肽的形式吸收。多肽作为基础营养物质，相比于蛋白质和氨基酸它具有容易吸收和生物利用度高的特点。因此，蛋白的吸收率低成为主要限制因素，单纯通过食物摄取蛋白质的方法，已经不能满足人体对蛋白质的需求。

之前，申请人已经提交一篇CN108341852A公开的“一种人参蛋白的提取分离方法”发明专利申请，和一篇CN108191952A公开的“一种人参茎叶蛋白的提取分离方法”发明专利申请。两篇专利分别阐述了从人参根部和茎叶提取纯化蛋白的方法。本发明专利在提交的两篇专利的基础上，采用蛋白酶酶解人参蛋白制备多肽的工艺，这种工艺有助于人体对蛋白更好的吸收。某些多肽类具有防治疾病、调节人体生理机能的功效，已经应用于医药和健康食品的领域。

发明内容