[发明专利]一种双酶分步酶解制备人参多肽的方法

权利要求书

1.一种双酶分步酶解制备人参多肽的方法，首先以人参粉末为原料制备人参蛋白粗提液，其特征在于，再按制备人参总蛋白、双酶酶解的过程制取人参多肽；

所述的制备人参总蛋白的过程，是将人参蛋白粗提液与预冷丙酮混合，其中人参蛋白粗提液与丙酮体积比为1:5～10；-20℃静置过夜，离心弃去上清挥干剩余丙酮后，加蒸馏水复溶，得到人参总蛋白提取液；

所述的双酶酶解的过程，是将人参总蛋白提取液80℃预热10min，降至酶解温度50～60℃，调pH至6.0～8.0；分别按人参粉末质量的0.1％～0.3％加风味蛋白酶和碱性蛋白酶，酶解4～26h；酶解结束后，90℃水浴中加热5～10min灭酶，冷却至室温，3000～5000r/min离心10min，上清液冷冻干燥得多肽冻干粉。

2.根据权利要求1所述的双酶分步酶解制备人参多肽的方法，其特征在于，所述的制备人参蛋白粗提液，具体过程是：人参根经清洗、干燥、切块、粉碎，得到的人参粉末；将人参粉末加入到磷酸盐缓冲液中，室温条件下用超声破碎仪超声30～60min，再4℃搅拌浸提12～20h，得到的浸提液离心留上清；沉淀再加入到磷酸盐缓冲液，4℃搅拌二次浸提12～20h，得到的二次浸提液离心留上清；合并两次上清液，得到人参蛋白粗提液。

3.根据权利要求1或2所述的双酶分步酶解制备人参多肽的方法，其特征在于，在制备人参蛋白粗提液的具体过程中，所述的粉碎，是将人参根切块经研磨后再用组织捣碎机粉碎；所述的人参粉末，是过80目筛的粉末。

4.根据权利要求1或2所述的双酶分步酶解制备人参多肽的方法，其特征在于，在制备人参蛋白粗提液的具体过程中，浸提时，人参粉末与磷酸盐缓冲液的质量体积比为1:10～20；二次浸提时，沉淀与磷酸盐缓冲液的质量体积比为1:10～20。

5.根据权利要求1所述的双酶分步酶解制备人参多肽的方法，其特征在于，在双酶酶解的过程中，所述的酶解，使用酶活力为20U/mg的风味蛋白酶酶解和酶活力为200U/mg的碱性蛋白酶酶解。

6.根据权利要求1、2或5所述的双酶分步酶解制备人参多肽的方法，其特征在于，在双酶酶解的过程中，所述的酶解，使用酶活力为20U/mg的风味蛋白酶酶和酶活力为200U/mg的碱性蛋白酶按等量混合酶解4～6h，或按等量分先后用酶活力为20U/mg的风味蛋白酶酶酶解20h，用酶活力为200U/mg的碱性蛋白酶酶解4～6h。

7.根据权利要求1、2或5所述的双酶分步酶解制备人参多肽的方法，其特征在于，在双酶酶解的过程中，所述的酶解，酶解温度53℃，pH7.0，先加入酶活力为200U/mg的碱性蛋白酶酶解6h，后加入酶活力为20U/mg的风味蛋白酶酶解20h。