[发明专利]一种CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的引物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于生物和医学检测技术领域，具体涉及一种CRP和miR‑365‑3p联合检测胃癌的引物、试剂盒及检测方法，其中引物包括扩增miR‑365‑3p和内参基因U6的上、下游引物，所述扩增miR‑365‑3p的上、下游引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述扩增内参基因U6的上、下游引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。试剂盒包括扩增miR‑365‑3p的上、下游引物，扩增内参基因U6的上、下游引物和CRP检测试剂。本发明的技术方案通过CRP和miR‑365‑3p联合检测胃癌，其中miR‑365‑3p的检测通过设计特异性高的靶标引物、内参引物，再配置成使用方便、检测结果可靠的试剂盒，设计出科学合理的PCR反应体系。该方法克服了miR‑365作为单独的胃癌标志物时易产生假阳性的问题，同时比单独的蛋白标志物具有更高的灵敏度和更好的预测能力。

技术领域

本发明属于生物和医学检测技术领域，具体涉及一种CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的引物、试剂盒及检测方法。

背景技术

胃癌是发生于消化系统中最常见的恶性肿瘤，其发病率位居全世界消化系统恶性肿瘤第一位，我国胃癌发病率及死亡率居恶性肿瘤第二位。由于胃癌早期症状比较不明显而难被患者察觉，一般有明显症状及就医时都已是中晚期胃癌，因错过了最佳的治疗时间，所以胃癌患者的死亡率较高，且生存质量较差。因此胃癌的早期发现、早期诊断是提高疗效的关键。

MicroRNA(miRNA)是一类内源性的非编码RNA，长约为20个核苷酸左右，miRNA广泛存在于真核生物的细胞内，能通过与3’端或5’端的非翻译区结合方式对DNA进行直接或间接的调控，从而影响细胞的增殖、分化、凋亡等，达到调节生物体生长与发育。miRNAs不仅存在组织及细胞中，同时存在于许多体液中，包括血清，血浆，唾液，尿液和羊水等。通常把血浆或是血清miRNA认为是循环miRNAs。miRNAs在体液的存在可表示无创癌症生物学标志物。由于失调的miRNA早期表达事件在肿瘤中发生，检测循环miRNA水平可用于早期癌症诊断和治疗反应的预测以及潜在的病人选择标准临床试验中的作用。近年来研究发现胃癌的发生与发展都涉及到多种miRNA的表达异常。

Hsa-miR-365a-3p是miR-365家族成员之一，有相关研究报道了miR-365与人类胃癌具有一定相关性，其表达水平与胃癌的发生发展程度呈负相关。

C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是临床常用的一种急性时相蛋白反应指标，健康人血液中存在微量CRP，但恶性肿瘤、炎症、感染时，机体巨噬细胞、淋巴细胞产生和分泌某些细胞因子，如白细胞介素6等，可刺激肝脏加速合成CRP，使其浓度有不同程度升高。血清CRP的检测对肿瘤评估具有重要的临床价值，一般在组织损伤6小时内CRP开始升高，48小时达高峰。研究发现高敏CRP的血清浓度可以作为胃、肠、肝、胆及胰腺肿瘤的一个较可靠的诊断参数。CRP在胃癌中是一种促癌因子，其表达与胃癌的发展程度呈正相关。

根据软件靶标预测，申请人发现miR-365能与CRP的种子区竞争性结合，抑制其对下游靶标基因的作用，因此利用血液中miR-365-3p和CRP的联合检测可以很好地预测胃癌。

发明内容

针对现有技术中的技术空白，本发明的目的是提供一种CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的引物、检测试剂盒及检测方法，该方法克服了miR-365作为单独的胃癌标志物时易产生假阳性的问题，同时比单独的蛋白标志物具有更高的灵敏度和更好的预测能力。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的第一个目的在于提出一种血液中CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的引物，包括扩增miR-365-3p和内参基因U6的上、下游引物；所述扩增miR-365-3p的上、下游引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述扩增内参基因U6的上、下游引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。