[发明专利]一种CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的引物、试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 201910057855.0 | 申请日： | 2019-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN109628597A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 廖兴华;黄凤;王君;张慧敏;项园;李佳蓬;杜庆;张同存 | 申请（专利权）人： | 武汉科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 下游引物 扩增 试剂盒 胃癌 引物 联合检测 内参基因 检测 蛋白标志物 检测结果 检测试剂 内参引物 医学检测 预测能力 标志物 假阳性 灵敏度 再配置 靶标 | ||
1.一种血液中CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的引物，其特征在于，包括扩增miR-365-3p和内参基因U6的上、下游引物；所述扩增miR-365-3p的上、下游引物如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示，所述扩增内参基因U6的上、下游引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
2.一种血液中CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的试剂盒，其特征在于，包括扩增miR-365-3p的上、下游引物，扩增内参基因U6的上、下游引物和CRP检测试剂；所述扩增miR-365-3p的上、下游引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述扩增内参基因U6的上、下游引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
3.根据权利要求2所述的一种血液中CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR MIX反应液和去离子水。
4.一种血液中CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取待检血液样本两份，一份常温离心，获取血浆，提取血浆中的总RNA并测定血浆纯度；另一份提取血清中的CRP；
(2)对步骤(1)中的总RNA进行逆转录，得到cDNA；
(3)分别采用实时定量PCR技术对miR-365-3p和内参基因U6的拷贝数进行定量检测，检测过程中所用引物如SEQ ID NO:1～4所示；
(4)对步骤(1)提取的血清CRP进行定量检测；
(4)对miR-365-3p PCR扩增产物和CRP进行分析，根据待检样本血清中miR-365-3p相对表达量与正常人之比、CRP相对表达量与正常人之比确定待检样本是否患有胃癌。
5.根据权利要求4所述的4一种血液中CRP和miR-365-3p联合检测胃癌的方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR反应体系为2×PCR Pre-Master Buffer 5μL，浓度为20uM的上游引物0.5μL，浓度为20uM的下游引物0.5μL，模板cDNA1μL，去离子水13μL。
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