[发明专利]一种纯化卡里奇霉素的制备方法

说明书

本发明公开了一种纯化卡里奇霉素γ₁^I的方法。该方法包括如下步骤：(1)将卡里奇霉素γ₁^I粗品进行正相制备柱层析，用有机溶剂进行洗脱，收集并合并含有卡里奇霉素γ₁^I的洗脱液；和(2)从步骤(1)所得洗脱液中分离得到卡里奇霉素γ₁^I高纯度精制品。本发明的方法能够得到纯度≥99％的高纯度的卡里奇霉素γ₁^I，而且收率高，环境友好，非常适合商业化生产。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及抗生素卡里奇霉素γ₁^I的纯化方法。

背景技术

卡里奇霉素(Calicheamicin)是一种小分子脂溶性化合物，属于十元环烯二炔类抗肿瘤抗生素，是从一株稀有放线菌小单孢菌Micromonospora echinospora sppcalichensis的发酵液中分离得到的，其主要活性成分为卡里奇霉素γ₁^I。卡里奇霉素具有很强的细胞毒性和抗肿瘤活性，能够嵌入DNA双螺旋的小沟中，引起DNA双链断裂从而杀死细胞。卡里奇霉素对多种肿瘤细胞均有强烈的杀伤作用，是迄今为止发现的活性最强的一类抗肿瘤抗生素。由于卡里奇霉素抗肿瘤作用极强，分子较小，已被作为一种单克隆抗体的“弹头”应用于临床。

卡里奇霉素γ₁^I的结构式如下：

有关报道卡里奇霉素的文献有美国化学会志(J.Am.Chem.Soc.,1987,109:3464-3466；J.Am.Chem.Soc.,1987,109:3466-3468)；日本抗生素杂志(J.Antibiotics.,1989,42:558-563；J.Antibiotics.,1989,42:1070-1087.)；以及中国专利CN101591632A等。这些文献报道了卡里奇霉素的理化性质、生物活性、发酵与分离纯化等内容。现有技术未涉及到大规模制备得到99％以上纯度的卡里奇霉素γ₁^I，因此急需一种可大规模制备的、高纯度的卡里奇霉素γ₁^I的制备方法，使其符合药品生产要求。

发明内容

本发明的目的就是提供一种环境友好、工艺简单的、可大规模实施的纯化卡里奇霉素γ₁^I的方法，本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种纯化卡里奇霉素γ₁^I的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将卡里奇霉素γ₁^I粗品进行正相制备柱层析，用有机溶剂进行洗脱，收集并合并含有卡里奇霉素γ₁^I的洗脱液；

(2)从步骤(1)所得洗脱液中分离得到卡里奇霉素γ₁^I精制品。

其中，步骤(1)所述的正相制备柱层析的制备柱填料为华谱X5正相填料,华谱X5正相填料是一种能重复利用的球形多元醇基键合相硅胶。步骤(1)所述的有机溶剂为乙酸乙酯-甲醇溶剂系统或二氯甲烷-甲醇溶剂系统，优选为乙酸乙酯-甲醇＝100:1-10(V:V)，或二氯甲烷-甲醇＝100:1-10(V:V)的溶液，更优选为二氯甲烷-甲醇＝100:3-6(V:V)的溶液。

其中，步骤(1)中，收集并合并卡里奇霉素γ₁^IHPLC纯度≥99％的洗脱液。

其中，步骤(1)所述卡里奇霉素γ₁^I粗品是由以下方法制备得到的：