[发明专利]一种大豆乳清废水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法

权利要求书

1.一种大豆乳清废水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法，其特征在于，包括步骤：

1）大豆乳清废水预处理

将大豆乳清废水进行离心去除大颗粒的杂质，保留上清液作为大豆乳清废水预处理液；

2）去除大豆乳清废水预处理液中的杂蛋白

将大豆乳清废水预处理液的pH调节至7.8~8.2，离心除去沉淀；

3）提取脂肪氧合酶

将步骤2）离心所得的上清液的pH值调节至5.7~6.0，离心去除上清液，所得沉淀物用蒸馏水溶解，即为脂肪氧合酶粗酶液；

还包括步骤4），脂肪氧合酶粗酶液利用超滤浓缩的方法初步提纯；

还包括步骤5），步骤4）所得酶液利用凝胶过滤色谱法进一步提纯，得到纯的脂肪氧合酶；步骤5）中凝胶过滤色谱法利用2-70KDa 的Sephadex G-75凝胶柱，以pH7.8，0.02mol/L的磷酸缓冲液平衡2~3个柱体积，平衡完毕后上样，以pH7.8，0.02mol/L的磷酸缓冲液为洗脱液洗脱；洗脱液流速为0.5mL/min；

步骤4）中，利用30KDa大小的改性聚醚砜超滤膜，在压力200~300KPa下对脂肪氧合酶粗酶液进行8~10倍超滤浓缩；

步骤2）中，将大豆乳清废水预处理液的pH调节至8.0；

步骤3）中，上清液的pH值调节至6.0。

2.如权利要求1所述大豆乳清废水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法，其特征在于：步骤4）中，利用超滤系统采用两级过滤方式进行超滤浓缩。

3.如权利要求1所述大豆乳清废水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法，其特征在于：步骤2）和步骤3）中，利用氢氧化钠溶液调节体系的pH。

4.如权利要求1所述大豆乳清废水逆pH梯度提取脂肪氧合酶的方法，其特征在于：步骤1）中，以3000~15000r/min的转速离心8~20min。