[发明专利]一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液和培养方法

说明书

本发明公开了一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液，培养液中包括以下添加剂：胰岛素‑转铁蛋白‑硒添加剂、β‑巯基乙醇、亚牛磺酸、1‑油酰基‑sn‑甘油‑3‑磷酸钠盐和红景天苷。并且公开了使用该培养液提高牛体外受精胚的发育质量的培养方法。应用本发明培养液及培养方法有效提高牛体外受精胚胎的发育率和发育质量。

技术领域

本发明涉及家畜胚胎工程领域，更具体的说是涉及一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液和培养方法。

背景技术

家畜胚胎体外培养是一项具有潜在的研究价值和商用价值的技术，可广泛应用于胚胎体外移植、动物基因编辑育种及优良家畜品种扩增等方面。但至今体外培养获得的胚胎在质量及数量上往往不及在体内正常发育的胚胎，体外受精胚胎在胚胎致密化阶段发育迟缓，导致胚胎卵裂率逐渐下降，形成囊胚的细胞数目少，进而损害胚胎质量，影响早期胚胎体外发育，显著制约着此技术的广泛应用。

因此，如何提高牛体外受精胚发育率和发育质量是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种培养液和培养方法，可有效提高牛体外受精胚发育率和发育质量。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液，培养液中包括以下添加剂：胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、β-巯基乙醇、亚牛磺酸、1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐和红景天苷。

胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂ITS-G能够较好的维持细胞的体外存活和增殖；β-巯基乙醇可促进细胞增殖，减缓细胞衰老速率，利于细胞的生长；亚牛磺酸能中和细胞毒素乙醛-过氧化级联反应的最终物质,从而限制ROS的有害作用；1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠能够促进细胞增殖；红景天苷具有提高细胞活力，改善细胞形态，减少胞核凝集，抗细胞氧化应激的保护作用。

五种添加剂添加到培养液中，可有效降低牛体外受精胚的氧化损伤，提高牛体外受精胚发育率和发育质量。

优选地，胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂体积分数为0.1-2％，β-巯基乙醇浓度为10-100μM，亚牛磺酸浓度为1-10mM，1-油酰基-SN-甘油-3-磷酸钠盐浓度为0.1-1μg/mL，红景天苷浓度为0.01-0.2mM。

优选地，培养液还包括SOF基础培养基、必需氨基酸、非必需氨基酸和无脂肪酸牛血清白蛋白EFAF-BSA。

优选地，必需氨基酸体积分数为0.1-2％，非必需氨基酸体积分数为0.1-2％，无脂肪酸牛血清白蛋白浓度为1-10mg/mL。

通过控制必需氨基酸、非必需氨基酸及无脂肪酸牛血清白蛋白可进一步提高牛胚胎体外发育质量。

优选地，每100mL SOF基础培养基包括26.168mg CaCl₂·2H₂O、9.999mgC₆H₅Na₃O₇·2H₂O、2.923mg谷氨酰胺、37.218mg MgSO₄·7H₂O、49.904mg肌醇、1.000mg酚红、53.378mg KCl、16.195mg KH₂PO₄、4.402mg丙酮酸钠、210.025mg NaHCO₃、629.399mg NaCl和0.0757mg乳酸钠。

优选地，培养液中还包括庆大霉素12μg/mL和头孢霉素12μg/mL。

一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养方法，将牛体外受精胚置于上述培养液中进行培养。