[发明专利]一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液和培养方法有效
| 申请号： | 201910049351.4 | 申请日： | 2019-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN109628382B | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 张涌;王永;张敏;张景程;王勇胜 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 培养液 牛体 发育 受精胚 红景天苷 磷酸钠盐 受精胚胎 硒添加剂 亚牛磺酸 转铁蛋白 巯基乙醇 胰岛素 油酰基 甘油 添加剂 应用 | ||
1.一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于，所述培养液包括SOF基础培养基、必需氨基酸、非必需氨基酸和无脂肪酸牛血清白蛋白；所述培养液中还包括以下添加剂：胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、β-巯基乙醇、亚牛磺酸、1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐和红景天苷；胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂体积分数为0.1-2%，β-巯基乙醇浓度为10-100μM，亚牛磺酸浓度为1-10mM，1-油酰基-SN-甘油-3-磷酸钠盐浓度为0.1-1µg/mL，红景天苷浓度为0.01-0.2mM。
2.根据权利要求1所述的一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于，必需氨基酸体积分数为0.1-2%，非必需氨基酸体积分数为0.1-2%，无脂肪酸牛血清白蛋白浓度为1-10mg/mL。
3.根据权利要求2所述的一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于，每100mL SOF基础培养基包括26.168mg CaCl2•2H2O、9.999mg C6H5Na3O7•2H2O、2.923mg 谷氨酰胺、37.218mg MgSO4•7H2O、49.904mg 肌醇、1.000mg 酚红、53.378mg KCl、16.195mgKH2PO4、4.402mg丙酮酸钠、210.025mg NaHCO3、629.399mg NaCl和0.0757mg 乳酸钠。
4.根据权利要求3所述的一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液，其特征在于，所述培养液中还包括庆大霉素12µg/mL和头孢霉素12µg/mL。
5.一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养方法，其特征在于，将牛体外受精胚置于权利要求1-4中任一项所述的培养液中进行培养。
6.根据权利要求5所述的一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养方法，其特征在于，对培养液预热至少2小时，然后将牛精卵结合16-22h的体外受精胚加入培养液中，CO2培养箱中培养7-8天。
7.根据权利要求6所述的一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养方法，其特征在于，胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、β-巯基乙醇、亚牛磺酸、1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐和红景天苷在预热时添加于培养液中。
8.根据权利要求7所述的一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养方法，其特征在于，牛体外受精胚在38.5℃、5%CO2、饱和湿度下培养。
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