[发明专利]一种脂肪酸诱导型启动子及其应用

说明书

本发明涉及启动子领域，特别是指一种脂肪酸诱导型启动子及其应用。具体为该启动子能够被脂肪酸诱导起始转录，即能诱导可操作地被连接到其上的目的基因的转录和表达，有利于目标RNA和蛋白的可控生产，最终实现在酿酒酵母中进行脂肪酸代谢的调控。一种脂肪酸诱导型启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9所示的任一种。鉴于启动子是基因工程表达载体的重要元件，且其表达情况受到细胞生长状况及外界温度等的影响，本发明采用参比质粒与受调控质粒共同转入同一株工程菌株的方法，来考察菌株荧光蛋白的表达情况。

技术领域

本发明涉及启动子领域，特别是指一种脂肪酸诱导型启动子及其应用。

背景技术

脂肪酸是一种重要的化合物，其衍生而来的脂类、烷烃类及醇类等具有重要的理论及应用价值。目前，脂肪酸的原材料主要来源于化石原材料的提取，利用微生物等工程菌株可实现脂肪酸的生物合成，但是由于微生物体内合成的天然脂肪酸往往是倾向于链长较长的脂肪酸，如以16碳及18碳脂肪酸偏多。如何能够更好的控制微生物工程菌株所合成脂肪酸的链长问题还一直处于不断的研究阶段。

酿酒酵母遗传背景清晰，被认为是生物安全型菌株并广泛应用于生产实践中。同时酿酒酵母作为模式微生物由于其可在较低的pH条件下（pH≥3）生长，其具有一定发酵并生产有机酸的优势。因此本发明选用酿酒酵母BY4741为研究对象，筛选其本身能够响应脂肪酸的启动子，以期对其后续脂肪酸合成途径进行调控。

目前国内外对于响应脂肪酸的启动子报道较少，其中最主要的是在大肠杆菌中发现的启动子，由于酿酒酵母脂肪酸合成途径的调控机制尚未研究清楚，在酿酒酵母中还未见有响应脂肪酸启动子方面的相关报道。因此本发明的目的为通过转录组测序的方法寻找酿酒酵母可以响应不同链长脂肪酸的启动子序列，为后续的脂肪酸途径的动态调控奠定基础。

本发明通过对酿酒酵母中响应脂肪酸启动子的筛选及鉴定过程中，利用绿色荧光蛋白及红色荧光蛋白较为准确的对脂肪酸响应启动子进行筛选，并且具有较好的重复性，得到能够响应脂肪酸的启动子，其中响应脂肪酸并促进基因表达型启动子6条，响应脂肪酸并抑制基因表达型启动子3条。这些启动子对不同链长的脂肪酸展现不同的偏好性。

发明内容

本发明提出一种脂肪酸诱导型启动子及其应用，具体为利用该启动子在酿酒酵母中进行脂肪酸代谢的调控。鉴于启动子是基因工程表达载体的重要元件，且其表达情况受到细胞生长状况及外界温度等的影响，本发明采用参比质粒与受调控质粒共同转入同一株工程菌株的方法，来考察菌株荧光蛋白的表达情况。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种脂肪酸诱导型启动子，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9所示的任一种。

含有所述的脂肪酸诱导型启动子质粒载体的构建方法，步骤为：将启动子克隆到载体PmCherry-leu2中，替代其启动子GPD1制得启动子质粒载体。

含有所述的脂肪酸诱导型启动子质粒载体的基因工程菌的构建方法，步骤为：首先将外源基因eGFP克隆到载体PRS316，制备绿色荧光重组载体，然后将启动子质粒载体和绿色荧光重组载体同时转入酿酒酵母中，通过营养缺陷型培养基筛选基因工程菌。

所述酿酒酵母为酿酒酵母BY4741或BY4742。

所述营养缺陷是指在SC-Ura-Leu营养缺陷型培养基上培养并筛选。