[发明专利]一种生物活性肽N14-Desacetoxytubulysin H的制备方法

说明书

本发明公开了一种生物活性肽N¹⁴‑Desacetoxytubulysin H的制备方法，包括以下步骤：制备TUV片段(2)；制备生物活性肽N¹⁴‑Desacetoxytubulysin H。本发明方法符合绿色化学标准：如利用可再生性资源、可回收、所用试剂毒性较小、反应经处理后对环境污染很小等；此外总产率高、立体选择性非常好、成本低、分离纯化简单方便、可用于大量制备。

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及一种生物活性肽N¹⁴-Desacetoxytubulysin H的制备方法。

背景技术

2000年，等人(Sasse,F.；Steinmetz,H.；Heil,J.；G.；Reichenbach,H.J.Antibiot.2000,53,879.)首次报导了一种从粘细菌中分离提取的线性四肽小分子。由于它们主要作用在细胞的微管蛋白细胞骨架(tubulin cytoskeleto)上，因此把这一类化合物命名为Tubulysins。

研究发现，Tubulysins不仅具有很高的抗癌活性(N¹⁴-Desacetoxytubulysin H的IC₅₀约为紫杉醇的100-5000倍，为埃博霉素B的10倍以上)，而且能够有效地抑制耐药性癌细胞的生长，但它的具体作用机理却是与埃博霉素和紫杉醇相反，即促进微管蛋白的聚合。长春碱的作用机理虽与其相似，但活性差很多。另外，Kaur等人(G.Kaur,M.Hollingshead,S.Holbeck,et al.Biochem.J.2006,396,235-242.)还发现Tubulysins还具有抑制血管新生的作用。此外，在水溶性方面Tubulysins相比其它抗癌药物有着明显的优势，其对特定的癌细胞表现出超强的抗癌活性，使其成为新型抗癌新药研发中颇受关爱的目标分子之一(如表1所示)。

表1 N¹⁴-Desacetoxytubulysin H对人癌细胞的体外细胞毒活性

通过粘细菌发酵来实现生物合成，但只能合成很少量的Tubulysins，不到4毫克/升，而且还需要几个非常繁琐的纯化步骤，因而不利于工业化生产。

从Tubulysins几年很短的发展历程看，Tubulysins以其独有的生物活性正在受到越来越多人的关注，可能在未来的几年会成为抗肿瘤药物中的明星分子。但其在合成上并不理想，至今Tubulysis及其类似物化学合成上报道的文献有几十篇，而合成路线大部分不是很完美，存在很大进一步探索的空间。

因此，有必要提供一种简洁，快速，可以大量合成Tubulysis的制备方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种生物活性肽N¹⁴-Desacetoxytubulysin H的制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种生物活性肽N¹⁴-DesacetoxytubulysinH的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、制备TUV片段(2)；

步骤2、制备生物活性肽N¹⁴-Desacetoxytubulysin H。

可选地，所述步骤1中的制备TUV片段(2)具体为：

其合成路线为：

包括以下步骤：

步骤1.1、化合物10的合成：