[发明专利]一条特异性检测乳酸乳球菌株IMAU11823的基因及其扩增用引物对、试剂盒和方法

说明书

本发明提供了一条特异性检测乳酸乳球菌株IMAU11823的基因及其扩增用引物对、试剂盒和方法，属于基因工程技术领域。本发明所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3。其扩增用引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明提供的基因具有良好的特异性，利用本发明提供的引物对对发酵乳制品样品中的乳酸乳球菌株IMAU11823进行检测，特异性良好，能与同源性较高的22个菌种相区分。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一条特异性检测乳酸乳球菌株IMAU11823的基因及其扩增用引物对、试剂盒和方法。

背景技术

乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)作为典型的乳酸菌，被认为是“公认安全性(GRAS)”菌株。乳酸乳球菌以其优良的发酵特性，常被应用于乳制品发酵(尤其是干酪生产)中。此外，由于乳酸乳球菌可以在发酵过程中产生独特的代谢产物，其在发酵产品的感官品质方面发挥着重要的作用。我国传统发酵乳制品种类丰富且历史悠久，其中蕴含着丰富的乳酸菌菌种资源。这些乳酸菌经过长期的自然选择和驯化，不乏具有优良生产特性的菌株。然而我国优良发酵剂菌种相对落后，拥有自主知识产权的优良发酵菌种较为缺乏。尤其是具有独特产酪香味且发酵性能优异的乳散乳球菌菌种更为稀少，因此筛选和保护优良发酵剂菌种迫在眉睫。

乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)IMAU11823是从我国内蒙古自治区锡林浩特市蒙古族传统发酵乳制品嚼口中分离得到的一株高产黏产酪香味且发酵性能优异的一株乳酸乳球菌。乳酸乳球菌株IMAU11823发酵酸乳达到发酵终点仅需8小时，产酸速率较快。此外，乳酸乳球菌株IMAU11823可以在发酵过程中高产黏产酪香味，赋予发酵酸乳独特的口感和风味。乳酸乳球菌株IMAU11823发酵性能优异，适合作为发酵剂用于工业生产，亟需一种可以定性检测发酵乳中该菌株的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一条特异性检测乳酸乳球菌株IMAU11823的基因及其扩增用引物对、试剂盒和方法。

本发明提供了一条用于特异性检测乳酸乳球菌株IMAU11823的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

本发明提供了一种用于检测乳酸乳球菌株IMAU11823的引物对，包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示。

本发明提供了一种用于检测乳酸乳球菌株IMAU11823的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物对。

优选的，所述试剂盒还包括10×PCRmix。

优选的，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品；所述阳性对照品为乳酸乳球菌株IMAU11823的基因组DNA；所述阴性对照品为双蒸水。

本发明提供了一种检测乳酸乳球菌株IMAU11823的方法，包括如下步骤：

(1)从待测样品中提取基因组DNA，得到PCR用模板DNA；

(2)利用上述引物对对步骤(1)所述模板DNA进行PCR扩增，得到 PCR扩增产物；

(3)利用琼脂凝胶电泳对PCR扩增产物进行判断：若在284bp处出现特征条带，则确定待测样品中含有乳酸乳球菌株IMAU11823。

优选的，步骤(1)所述待测样品包括发酵乳制品。

优选的，步骤(2)所述PCR扩增为50μL反应体系：10×PCRmix 10μL， 10mol/L上游引物0.4μL，10mol/L下游引物0.4μL，DNA模板100ng，双蒸水补充至50μL。