[发明专利]人Agrin抗原、人Agrin抗体检测试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了人Agrin抗原、ELISA检测试剂盒及其制备方法与应用。所述人Agrin抗原包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，还提供了七种分别含有上述七种人Agrin的抗原的检测试剂盒，以及1种同时含有上述七种人Agrin抗原的检测试剂盒。该人Agrin检测试剂盒，检测人血清中的Agrin抗体，特异性强，反应灵敏度高，高通量、成本低，能够对对重症肌无力病症进行诊断，适于大规模推广应用。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及人Agrin抗原、人Agrin抗体检测试剂盒及其制备方法与应用。

背景技术

重症肌无力(Myasthenia gravis，MG)，是常见的肌肉神经接头(neuromuscularjunction，NMJ)疾病。在大多数患者中，MG可能来自一个对乙酰胆碱受体(AChRs)的自身免疫反应，能够在80％-85％的MG患者中检测到AChRs的自身抗体。然而，AChR抗体在大约20％的MG患者中没有被检测到。有证据表明，这些“血清反应阴性”的患者可以产生对NMJ形成或保持非常关键的蛋白抗体。从运动神经元释放的聚集蛋白Agrin，结合到低密度脂蛋白受体相关的蛋白4(LRP4)，激活受体酪氨酸激酶MuSK来指导NMJ的形成。大约40％-70％的血清反应阴性患者有MuSK自身抗体。其余6％-12％的MG患者对AChR和MuSK抗体具有双血清阴性反应。聚集蛋白Agrin是从运动神经终端释放出来的硫酸类肝素蛋白多糖。其调节神经肌肉接点的形成、维持和再生，并且干扰聚集蛋白功能，可导致神经肌肉传递不足在少数MG病人中聚集蛋白抗体可以在有或者没有针对AChR，MuSK或者LRP4抗体的情况下被检测出来。聚集蛋白抗体只有在MG病人中可以被检测出来，提示这些抗体对于MG来说是特异性的。目前还没有人Agrin抗体检测试剂盒的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种人Agrin抗原及其制备方法、人Agrin抗体检测试剂盒及其制备方法与应用，该检测试剂盒能特异性检测人血清中的LRP4抗体，对重症肌无力有诊断意义，反应灵敏，成本低、适于大规模推广应用。

本发明是这样实现的：

本发明的目的之一在于一种人Agrin抗原，包括以下任意一种片段或者七种片段：

片段1：Agrin-40，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

片段2：Agrin-411，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

片段3：Agrin-701，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；

片段4：Agrin-1103，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

片段5：Agrin-1281，氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；

片段6：Agrin-1635，氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；

片段7：Agrin-1864，氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

本发明的目的之二在于提供人Agrin抗原的制备方法，包括如下步骤：

步骤1、将Agrin-40、Agrin-411、Agrin-701、Agrin-1103、Agrin-1281、Agrin-1635和Agrin-1864的7个片段的DNA序列分别进行基因合成，设计引物PCR扩增后，分别连接进表达载体，构建重组表达质粒；

步骤2、将构建好的重组质粒转化进入表达菌，构建重组表达工程菌；

步骤3、人Agrin抗原的诱导表达及纯化。