[发明专利]一种检测红豆杉属植物基因表达水平的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种检测红豆杉属植物在经过处理后目标基因表达水平变化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括能够特异性扩增内参基因的引物对，其中，所述经过处理是指经过ABA处理，所述内参基因为RBCL和GAPDH1；或者，所述经过处理是指经过MeJA处理，所述内参基因为SAND和GAPDH1；或者，所述经过处理是指经过SA处理，所述内参基因为ARP2和GAPDH1。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，能够特异性扩增SAND基因的引物对序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示；能够特异性扩增ARP2基因的引物对序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；能够特异性扩增RBCL基因的引物对序列如SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示；能够特异性扩增GAPDH1基因的引物对序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述经过处理是指经过COR处理，所述内参基因为ARP2和18S rRNA；或者，所述经过处理是指经过ETH处理，所述内参基因为GAPDH1和Actin基因。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，能够特异性扩增Actin基因的引物对序列如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示；能够特异性扩增18S rRNA基因的引物对序列如SEQID NO:11和SEQ ID NO:12所示。

5.根据权利要求 1-4任一所述的试剂盒，其特征在于，所述红豆杉属植物为曼地亚红豆杉(Taxus×media)。

6.能够扩增内参基因的引物对在制备用于检测红豆杉属植物在经过不同处理后目标基因表达水平变化的试剂盒中的用途，其中，所述经过处理是指经过ABA处理，所述内参基因为RBCL和GAPDH1；或者，所述经过处理是指经过MeJA处理，所述内参基因为SAND和GAPDH1；或者，所述经过处理是指经过SA处理，所述内参基因为ARP2和GAPDH1。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述经过处理是指经过COR处理，所述内参基因为ARP2和18S rRNA；或者，所述经过处理是指经过ETH处理，所述内参基因为GAPDH1和Actin基因。

8.一种检测红豆杉属植物在经过处理后目标基因表达水平变化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)获得经过处理前后的红豆杉属植物的组织样本，并提取所述组织样本的RNA；

2)对步骤1)获得的RNA样本进行反转录，获得cDNA模板；

3)利用能够特异性扩增目标基因的引物对和能够特异性扩增选定内参基因的引物对对步骤2)获得的cDNA模板进行荧光定量PCR扩增；

4)通过比较内参基因和目标基因的Ct值，获得所述目标基因的表达水平变化，

其中，所述经过处理是指经过ABA处理，所述内参基因为RBCL和GAPDH1；或者，所述经过处理是指经过MeJA处理，所述内参基因为SAND和GAPDH1；或者，所述经过处理是指经过SA处理，所述内参基因为ARP2和GAPDH1。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述经过处理是指经过COR处理，所述内参基因为ARP2和18S rRNA；或者，所述经过处理是指经过ETH处理，所述内参基因为GAPDH1和Actin基因。