[发明专利]一种游离肼的检测方法及其在磷酸西格列汀原料药杂质检测中的应用

说明书

本发明提供一种基于离子色谱法的游离肼的检测方法，色谱条件为：色谱柱：Thermo Dionex IonPac CS12A色谱柱，250mm*4mm；保护柱：Thermo Dionex IonPac CG12保护柱，4mm*50mm；阳离子抑制器CERS 4mm；检测器：电导检测器；流动相：5mmol/l甲烷磺酸；流速：0.8ml/min‑1.3ml/min；柱温：28℃‑35℃；进样量：25ul。该检测方法的最低线性检出浓度为0.18μg/ml，最低检出浓度为0.05μg/ml。本发明还提供上述检测方法在磷酸西格列汀原料药杂质检测中的应用。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种游离肼的检测方法及其在磷酸西格列汀原料药杂质检测中的应用。

背景技术

糖尿病是一种以糖代谢紊乱为主的慢性综合性疾病，包括胰岛素依赖型糖尿病(Ⅰ型糖尿病)、非胰岛素依赖型糖尿病(Ⅱ型糖尿病，占比90％)及妊娠期糖尿病。国际糖尿病联盟发布的全球糖尿病地图(第8版)显示，2017年全球糖尿病患病率(20～79岁)大约为8.8％，约有4.25亿成人糖尿病患者，到2045年，这一数字可能达到6.29亿。

中国是糖尿病患者人数最多的国家，约占世界总数的四分之一。糖尿病作为一种高发慢性病，具有病情不可逆、后期并发症多等特点。血糖若控制不佳，糖尿病慢性化可引发糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变等并发症，造成肾衰、失明等严重后果，给社会和家庭造成巨大负担。同时，糖尿病也是引起众多心血管疾病的危险因素，如心肌梗死、脑卒中等。

相关降糖机制研究表明，人体内血糖升高时可促进活性肠促胰岛激素胰高血糖素样肽-1(GLP-l)和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌肽(GIP)的分泌，进而激发胰岛素的合成分泌过程，最终达到控制血糖的效果。体内的GLP-1和GIP容易被二肽基肽酶IV(DPP-IV)降解失活；因此，二肽基肽酶IV成为糖尿病治疗的靶点。磷酸西格列汀是首个获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗II型糖尿病的二肽基肽酶-4抑制剂(DPP-4抑制剂)，可有效抑制胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽(GIP)的灭活，提高内源性GLP-1和GIP的水平，促进胰岛β细胞释放胰岛素，同时抑制胰岛α细胞分泌胰高血糖素，从而提高胰岛素水平，降低血糖，且不易诱发低血糖和增加体重。

磷酸西格列汀，化学名称：7-[(3R)-3-氨基-1-氧-4-(2,4,5-三氟苯基)丁基]-5,6,7,8-四氢-3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑酮[4,3-a]吡嗪磷酸盐(1:1)一水合物，化学分子式C₁₆H₁₅F₆N₅O·H₃PO₄·H₂O，化学结构如式(I)所示。

水合肼(N H₂NH₂·xH₂O)是磷酸西格列汀合成的起始物料之一，如果合成反应不充分，很可能导致磷酸西格列汀原料药中残留杂质游离肼。由于含量极微，一直未纳入磷酸西格列汀杂质的检测项目。2018年7月欧盟药品局(EMA)发布公告，华海药业供应的缬沙坦原料未知杂质中发现极微量的基因毒性杂质亚硝基二甲胺(以下称NDMA)，并据此在成员国召回使用华海药业供应缬沙坦原料生产的药品。此事件后，公众对药品原料中的极微量杂质和药品安全给予了极大的关注。游离肼(N H₂NH₂)是一种基因毒性杂质，为确保用药安全性，有必要对磷酸西格列汀原料药中的游离肼进行定性和定量检测。

现有技术有报道的针对肼类物质的检测方法有：