[发明专利]CADASIL病人特异性血管平滑肌细胞与血管内皮细胞的制备方法

说明书

本发明公开了CADASIL病人特异性血管平滑肌细胞与内皮细胞的制备方法。本发明提供了一种制备CADASIL疾病细胞模型的方法，包括如下步骤：a)将来源于携带NOTCH3基因杂合突变的CADASIL病人的离体成纤维细胞进行重编程得到诱导多能干细胞系；b)将所述诱导多能干细胞系定向分化为血管壁细胞，得到CADASIL疾病细胞模型。本发明将利用重编程技术和定向分化技术在体外获得CADASIL患者特异的诱导多能干细胞，并将其定向分化成血管平滑肌细胞(VSMC)与血管内皮细胞(VEC)，用于研究CADASIL小动脉病变的发病机制，并为药物筛选提供平台。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及CADASIL病人特异性血管平滑肌细胞与血管内皮细胞的制备方法。

背景技术

伴有皮质下梗塞和白质脑病的常染色体显性遗传性脑小动脉病(Cerebralautosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts andleukoencephalopathy,CADASIL)是由NOTCH3基因杂合突变引起的遗传性脑血管病，临床上表现为反复发作的短暂性脑缺血发作(TIA)和中风，进行性认知功能减退和精神障碍。由于疾病于青中年时期发病且进行性加重，CADASIL可对患者的生活质量和寿命产生严重影响。该病的发病机制目前尚不清楚，建立疾病细胞模型将有利于发病机制的进一步研究和疾病治疗手段的开发。

CADASIL发病机制的研究在很大程度上受现有疾病模型的限制。现有的CADASIL小鼠模型虽然可以模拟CADASIL患者血管功能和结构的异常，但其无法完全模拟患者所有的临床症状，并且基因背景与患者也不相同。永生化的原代血管平滑肌细胞由于接受了病毒感染或质粒转染而无法代表正常人体细胞，且由于CADASIL属于罕见病很难获得大量的原代细胞。因此，迫切需要一种可持续扩增，可以代表患者疾病特征并且方便临床转化的模型。近年来，体细胞重编程和体外定向分化技术的发展为许多疾病，特别是遗传病的研究提供了有效的手段。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是制备携带特定突变的CADASIL病人的特异性血管平滑肌细胞(VSMC)与血管内皮细胞(VEC)的制备方法。

本发明的一个目的是提供一种制备CADASIL疾病细胞模型的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

a)将来源于携带NOTCH3基因杂合突变的CADASIL病人的离体成纤维细胞进行重编程得到诱导多能干细胞系；

b)将所述诱导多能干细胞系定向分化为血管壁细胞，得到CADASIL疾病细胞模型。

本发明另一个目的是提供一种由源于CADASIL病人的离体成纤维细胞制备血管壁细胞的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

a)将来源于携带NOTCH3基因杂合突变的CADASIL病人的离体成纤维细胞进行重编程得到诱导多能干细胞系；

b)将所述诱导多能干细胞系定向分化为血管壁细胞，得到CADASIL疾病细胞模型。

上述方法中，所述NOTCH3基因杂合突变为经临床诊断为CADASIL致病突变的NOTCH3基因杂合突变，本发明的实施例为c.3226C>T,p.R1076C，携带其他文献报道过或临床确诊可以导致该病的NOTCH3基因杂合突变也可。

或，所述离体成纤维细胞为离体皮肤成纤维细胞；所述离体成纤维细胞也携带NOTCH3基因杂合突变；

或，所述血管壁细胞为血管壁中层细胞和/或血管壁内膜细胞；

和/或，所述血管壁中层细胞具体为血管平滑肌细胞；

和/或，所述血管壁内膜细胞具体为血管内皮细胞。