[发明专利]一种用于宫颈病变预警的指标及其诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于宫颈病变预警的指标及其诊断试剂盒，其特征是将Piwil2作为宫颈病变预警的特异指标，并用于制备宫颈病变的诊断试剂盒。采用Piwil2特异的抗体或核酸探针，直接或间接标记荧光基团、化学发光基团、放射性核素、酶或胶体金，基于采用酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫、固相膜免疫、放射免疫、免疫组织化学技术，或定量聚合酶链反应(Q‑PCR)、原位杂交技术(ISH)、液相杂交技术，分别对宫颈脱落细胞、宫颈活检组织或手术切除的宫颈组织中Piwil2蛋白和mRNA进行检测，用于宫颈病变筛查、分流、诊断和预后判断。

技术领域

本发明涉及临床诊断技术领域，具体地说，涉及一种用于宫颈病变筛查、分流、诊断和预后判断的指标及其诊断试剂盒。

背景技术

高危型人乳头瘤病毒(high risk HPV)持续感染导致宫颈上皮细胞发生病变，经过一个连续、渐进的过程，包括子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelialneoplasia，CIN)1、2、3阶段，最终发展为宫颈癌，大约需要10年左右的时间。宫颈癌病因明确、较长的癌前病变阶段等特点为早期病变筛查、诊断、治疗提供了充足的时间，一定意义上说宫颈癌是可防可治的。因此，敏感、特异的诊断方法尤其重要。

目前，临床常用的筛查方法主要为宫颈脱落细胞学和HPV DNA检测。其中，宫颈脱落细胞学检查受取材、制片及染色质量，阅片医师的业务水平、工作状态等诸多因素影响，其敏感性较差，漏诊率较高。HPV DNA检测一般采用荧光定量PCR或导流杂交法分型，灵敏度很高，但是特异性不尽人意。因为，女性一生中可能会多次感染HPV，其中大多数个体可以自行清除病毒，仅为一过性感染，只有HPV持续存在并与宿主DNA发生整合才会引起细胞病变。HPV DNA检测只能反映当次样本中HPV情况，无法区分病毒DNA整合和一过性感染，加之目前没有很好的抗HPV药物，HPV DNA检测阳性结果会造成医生向患者解释困难及患者心理恐慌，导致过度医疗。

目前的临床诊疗规范认为，CIN1中57％-60％可以自然消退和逆转，主要以随访监测为主，但是有持续进展的风险；CIN2/3则属于高级别癌前病变，需要及时处理，一般采用消融或切除治疗，但其中约32％-43％仍然可以自然逆转，并且手术切除会导致宫颈机能不全等并发症，对患者身体和心理造成伤害，且仍存在复发风险。

鉴于此，确立一个高度特异的指标，用于宫颈病变的诊断、手术指征的确认、及病变预后的判断，将使众多女性获益，给临床医生带来便利，同时也为社会节约了医疗资源。

目前的肿瘤标志物基本都是肿瘤发生后，由肿瘤细胞异常产生或机体对肿瘤刺激反应产生的物质，其出现滞后于肿瘤细胞的形成，且缺乏特异性。Piwil2属于PIWI/AGO家族成员，具有高度进化保守性，胚胎时期主要在胚胎干细胞和生殖干细胞表达，出生后仅生精细胞表达Piwil2，其他正常组织器官，包括宫颈组织，均无表达。但是在不同组织来源的肿瘤细胞系、临床肿瘤组织Piwil2表达阳性。我们还发现，Piwil2还具有通过表观遗传途径上调转录因子c-myc、nanog、sox2、oct4和klf4的表达，使正常成体细胞发生重编程而转化为肿瘤起始细胞的作用。因此，Piwil2既是一种重要的肿瘤睾丸抗原，也是细胞恶性转化的关键效应分子。

发明内容

本发明是为了解决上述现有技术存在的不足，提供一个用于宫颈疾病诊断的标志物及诊断试剂盒，特异检测宫颈病变组织、宫颈脱落细胞中Piwil2蛋白和mRNA的表达水平，为提高诊断特异性，准确判断病变进展风险、分流患者、预后评价，从而精准治疗，节约医疗资源。

本发明为解决技术问题采用如下技术方案：

本发明一种用于宫颈病变预警的指标及其诊断试剂盒，其特点是：Piwil2作为宫颈病变预警的指标，并用于制备宫颈病变的诊断试剂盒；