[发明专利]一种快速同步获得乌菜雄性不育与保持系转基因植株方法

权利要求书

1.一种快速同步获得乌菜雄性不育系与保持系转基因植株方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤1、在乌菜盛花期，去除雄性不育系与其保持系主花序上已开放的花，选取保持系主花序3~5 mm大小的花蕾，完全剥离萼片与花瓣，使其露出花药；

步骤2、将含有植物表达载体的农杆菌培养至OD₆₀₀=0.5时，离心收集菌体，用侵染液悬浮菌体至OD₆₀₀=0.2，室温静置30 min后备用；

步骤3、利用注射器等工具将步骤2所得产物滴至花药上，静置30 min后，避光处理2天；

步骤4、2天后，花蕾开放，利用尖头镊子将保持系的花药取下，对雄性不育系与其保持系花的柱头进行人工授粉；

步骤5、授粉完成后，用纸袋将花序套住并密封，防止昆虫进入；

步骤6、在同一花序上对长至3~5 mm的花蕾重复上述操作3次，用镊子将尚未开放的花蕾去除，对花序进行封顶；

步骤7、一周时间后，去除纸袋，正常田间管理，待种子成熟后，分别收取雄性不育系与其保持系的种子；

步骤8、将收获的种子播种于含有Kan的筛选培养基上，筛选萌发正常、子叶与真叶为绿色的幼苗，取其部分叶片进行GUS染色，GUS染色呈蓝色的即为转基因阳性植株；

所述侵染液成分为每升MS中加入蔗糖50 g、Silwet 300 µL、MES 0.5 g、乙酰丁香酮0.2 mg和L-半胱氨酸0.12 g，pH为5.8。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤8中筛选培养基由MS、蔗糖、Kan和琼脂组成，其中每升MS中加入蔗糖30 g、Kan 500 mg、琼脂15 mg，pH为5.8。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2中所述农杆菌具体为农杆菌EHA105。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2中所述植物表达载体具体为pBI121。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，将步骤4替换为2天后，花蕾开放，利用干净毛笔，轻轻蘸取保持系花药上的花粉，对雄性不育系及保持系花的柱头进行辅助授粉。