[发明专利]一种杨梅菌种驯化方法

权利要求书

1.一种杨梅菌种驯化方法，其特征在于，所述杨梅菌种驯化方法将葡萄酒酵母从斜面试管分别接种到不同浓度梯度杨梅汁的培养基当中，在30℃下培养2天，观察气泡产生情况，采用血球计数法测菌体浓度，取杨梅原汁浓度较高且菌体浓度大的稀释涂平板，杨梅汁中加2％营养琼脂，制成固体培养基，30℃下培养，挑取最大尽量菌落，不断重复以上操作，直至出现酵母在较高浓度杨梅汁中起酵时间在24小时以内的，取发酵液稀释涂平板，挑取大菌落涂斜面保存。

2.如权利要求1所述的杨梅菌种驯化方法，其特征在于，所述杨梅菌种驯化方法包括以下步骤：

(1)配制杨梅汁质量比含量20％、4-6°Bx麦汁质量比含量80％的培养液100ml，加入活化的酵母10ml，在30℃温度下培养，前12小时通氧3次，每4小时通一次；12小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×10⁸个/ml时，进行下一步操作；

(2)配制杨梅汁质量比含量40％、4-6°Bx麦汁质量比含量60％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml，加入培养的酵母10ml，在30℃温度下培养，前16小时每4小时通氧一次；16小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×10⁸个/ml时，进行下一步操作；

(3)配制杨梅汁质量比含量60％、4-6°Bx麦汁含量40％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml，加入培养的酵母10ml，在30℃温度下培养，前20小时每4小时通氧一次；20小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×10⁸个/ml时，进行下一步操作；

(4)配制杨梅汁含质量比量80％、4-6°Bx麦汁含质量比量80％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml，加入培养的酵母10ml，在30℃温度下培养，前24小时每4小时通氧一次；24小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×10⁸个/ml时，进行下一步操作；

(5)配制杨梅汁质量比含量100％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml，加入上一步骤培养的酵母10ml，在30℃温度下培养，前28小时每4小时通氧一次；28小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×10⁸个/ml时，进行下一步操作；

(6)将所得酵母培养液在无菌条件下1000r/min离心10min，倾去上清液，用无菌生理盐水洗涤菌体，再离心得湿菌体，加入无菌水制成菌悬液；

(7)配制2％海藻酸钠和6％聚乙烯醇混合载体溶液灭菌冷却后，与菌悬液混合均匀，凝胶内包埋菌量大于4.7×10⁷cfu/ml，用注射器将其注入交联剂CaCl₂溶液中，形成小球，在交联剂中硬化4h，用无菌水洗涤；

(8)将步骤(7)中配制的包埋菌小球10个，置于100ml杨梅汁质量比含量100％、糖度20°Bx的培养液中，在30℃温度下培养，前12h每4小时通氧一次，12h后停止通氧，培养至出现大量气泡；

(9)破碎步骤(8)包埋菌小球，放置于杨梅汁质量比含量100％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml中，在30℃温度下培养，前28小时每4小时通氧一次；28小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×10⁸个/ml；

(10)重复步骤(6)、(7)、(8)、(9)，直至制作的包埋菌小球能在24h内起酵，产生酒精，即为驯化完成。

3.如权利要求2所述的杨梅菌种驯化方法，其特征在于，杨梅汁的制取包括：

⑴、原料的选择：以自然落地杨梅果为主，也可以是新鲜熟杨梅，去除腐败、过熟、变质的杨梅果；

⑵、浸泡：把清理好的新鲜杨梅放入3％的食盐水中浸泡约15至20分钟；

⑶、清洗：把浸泡过的杨梅放在纯水中清洗2－3分钟以去除食盐；

⑷、去核、取汁：利用杨梅取汁机对浸泡好的杨梅去核打浆；分两步对杨梅果浆进行过滤，即先利用滤孔大小约0.5mm的振动筛对杨梅果浆进行粗滤，再利用纱布对粗滤好的果浆进行精滤。