[发明专利]数字微流控芯片及基于其的病原体免疫检测方法

权利要求书

1.一种病原体免疫检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制作数字微流控芯片；所述数字微流控芯片包括上样孔、形成试剂储池的试剂电极、形成液滴运行通道的输运电极以及形成检测区的检测电极；

(2)在所述数字微流控芯片的检测区修饰抗原；

(3)加入样本并运行数字微流控芯片，通过荧光检测系统CCD拍照检测荧光信号并进行定量分析。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述制作数字微流控芯片的具体步骤包括：

步骤1：制作下层微流控芯片：

(1)在基底层上设置电极层；所述电极层包括形成试剂储池的试剂电极、形成液滴运行通道的输运电极以及形成检测区的检测电极；

(2)所述电极层上设置SiO₂绝缘层；

步骤2：制作上层微流控芯片：

(1)所述上层微流控芯片采用ITO导电玻璃，在所述ITO导电玻璃上开设有上样孔，所述上样孔与所述液滴运行通道相通；

(2)所述上层微流控芯片上设置试剂储池口，所述试剂储池口和试剂电极共同形成试剂储池；

步骤3：将所述上层微流控芯片和下层微流控芯片上下叠合在一起。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中所设置的电极层包括形成废液储池的废液电极和形成PBS池的PBS电极，所述上层微流控芯片上设置有废液储池口和PBS池口，所述废液储池口和所述废液电极共同形成所述废液储池，所述PBS池口和所述PBS电极共同形成所述PBS池；所述废液储池、PBS池分别与所述液体运行通道相通。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述在所述数字微流控芯片的检测区修饰抗原，包括：

(1)采用多层微纳加工技术，在检测电极上的绝缘层表面沉积金膜，并利用湿法刻蚀技术进行图案化；

(2)在沉积有金膜的检测电极上包被抗原。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述在沉积有金膜的检测电极上包被抗原或抗体，包括，

(1)将抗原用PBS缓冲液稀释至0.1mg/ml；

(2)取2.0mg盐酸硫醇亚胺溶于1.0ml蒸馏水中，得到浓度为2.0mg/ml的巯基化试剂；

(3)将1.0ml上述步骤(1)的抗原溶液和25μl上述步骤(2)的巯基化试剂混合，室温条件下搅拌反应0.5h；

(4)用20mM的PBS缓冲液，其中含0.15M NaCl和1.0mM EDTA，pH为7.2，对步骤(3)所得到的反应液透析48h，期间每2h更换一次透析液，得到巯基化抗原溶液；

(5)将镀有金膜的芯片洗净并晾干，在待包被金膜表面滴加3μl步骤(4)中所获得的巯基化抗原溶液，使其完全覆盖金膜表面，37℃温育1h。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述加入样本并运行数字微流控芯片，通过荧光检测系统CCD拍照检测荧光信号并进行定量分析，具体为：

(3.1)将血清样品由上样孔的位置处加入，血清样品经由输运电极形成的液体运行通道输送至其中一个检测区，血清样品在相应检测区与邻近电极间往复运动，使血清中的抗体与检测区修饰的抗原充分反应；

(3.2)由试剂储池产生的荧光标记二抗液滴输运至检测区，与吸附在检测区表面的抗体反应，该抗体为一抗，孵育时液滴在检测区与相邻电极间间歇往复运动，促进抗体的识别与结合；

(3.3)通过荧光检测系统CCD拍照检测荧光信号并进行定量分析。