[发明专利]一种提高多杀菌素产量的发酵方法

说明书

本发明公开了一种提高多杀菌素产量的发酵方法，包括：S1、菌种活化：将刺糖多孢菌接种于种子培养液中进行活化培养，得到活化菌种；S2、扩大培养：将步骤S1得到的活化菌种，接种到增殖培养液中，进行扩大培养，得到增殖菌种；S3、发酵产生多杀菌素：将步骤S2得到的增殖菌种，接种到发酵培养液中，进行发酵培养，得到含多杀菌素的发酵液，与现有技术相比，本发明增加了细胞的活性，缩短了发酵周期，有效的提高了多杀菌素产量，同时避免了发酵过程中泡沫的产生，降低了生产成本，为我国多杀菌素的产业化提供了技术支持。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体地说，涉及一种提高多杀菌素产量的发酵方法。

背景技术

多杀菌素(Spinosad)，又名刺糖菌素，是由放线菌属中的刺糖多孢菌(Saccharopolyora spinosa)经过有氧发酵产生的胞内次级代谢产物，是一种新型的大环内酯类抗生素，其主要活性成份为spinosyn A(约占85％-90％)和spinosyn D(约占10％-15％)。

多杀菌素是天然生成的抗生素，对鳞翅目及双翅目等害虫均有良好的防治效果，多杀菌素对昆虫存在快速触杀和摄食毒性，通过刺激昆虫神经系统，导致非功能性的肌肉收缩、衰竭，并伴随颤抖和麻痹。与一般杀虫剂相比，多杀菌素兼具生物农药的安全性和化学合成农药的快速性效果，具有低毒、低残留、对昆虫天敌安全、自然分解快等诸多优点。在日益重视环保和安全的今天，多杀菌素作为生物农药，以其无公害、安全、绿色环保受到越来越多的关注，成为开发研究的热点。

我国是农业大国，农药需求量很大，实现多杀菌素的产业化，以低毒的生物农药取代目前大量使用的毒性较高的化学农药，具有极其重要的意义，目前国内市售的多杀菌素，主要由美国陶氏益农公司(Dow Agrosciences Company)生产的、分别用于蔬菜和棉花的虫害防治的菜喜(2.5％多杀菌素悬浮剂)和催杀(48％多杀菌素悬浮剂)，国内多杀菌素的研究还处于实验阶段。

CN103667404A公开了一种两阶段溶氧控制提高多杀菌素产量的方法，通过控制多孢菌菌体生长和多杀菌素合成两个阶段的不同溶氧需求，提高多杀菌素产量，使得多杀菌素产量在发酵196小时达到160.9mg/L。

CN107523598A公开了一种提高多杀菌素产量的发酵方法，通过向发酵液中补充复合有机氮源，提高多杀菌素的产量，使得多杀霉素产量在发酵216小时达到5.66g/L。

综上所述，目前我国对多杀菌素发酵工艺的研究大多为控制不同阶段的溶解氧、优化发酵培养基，虽然取得了一定进步，但传统的调整发酵培养基的氮源和碳源对多杀菌素产量的影响较小，没有实质性突破，同时存在，发酵周期长，发酵过程中容易产生泡沫等问题，不能满足工业化生产的需求，因此，亟需一种有效的方法来提高多杀菌素发酵的产量。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供了一种提高多杀菌素产量的发酵方法，提高了细胞的活性，实现了多杀菌素的高效生产，同时缩短了发酵周期，有效避免了发酵过程中泡沫的产生，降低了生产成本，为我国多杀菌素的产业化提供了技术支持。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种提高多杀菌素产量的发酵方法，包括以下步骤：

S1、菌种活化：

将刺糖多孢菌接种于种子培养液中进行活化培养，得到活化菌种；

S2、扩大培养：

将步骤S1得到的活化菌种，接种到增殖培养液中，进行扩大培养，得到增殖菌种；

所述的增殖培养液包括：玉米淀粉30-45g/L、大豆粉20-30g/L、海藻粉10-15g/L、硫酸镁0.1-0.3g/L和钼酸铵0.3-1.0g/L；120-130℃灭活30min；