[发明专利]增强羊栖菜多糖生物活性的方法

说明书

本发明公开了一种增强羊栖菜多糖生物活性的方法，包括以下步骤：羊栖菜粗多糖于pH为4.5～7.0的缓冲溶液中、在由果胶酶和糖化酶组成的复合酶的作用下进行降解反应；所得的反应液除酶后过滤，所得滤液浓缩后用截留分子量为3500Da的透析袋透析，将所得的透析液浓缩，冷冻干燥，得到羊栖菜复合酶解多糖ESFP。采用本发明的方法不但能显著提高羊栖菜多糖的抗氧化活性与胆酸结合能力，还能增强其对巨噬细胞的免疫调节活性。

技术领域

本发明属于化学化工技术领域，涉及一种通过对羊栖菜多糖进行酶解从而增强其生物活性的方法。

背景技术

羊栖菜中含有各种具有健康益处的生物活性成分，尤其是其中的酸性多糖，具有抗病毒，抗真菌，抗菌，抗氧化，抗炎，降血脂和抗肿瘤特性。由于羊栖菜价格低廉，分布广泛，因此将羊栖菜加工为功能性食品或开发成低副作用的药物具有良好的研究前景。羊栖菜中碳水化合物的含量较高，但其中的粗多糖的生物活性相对偏低。多糖的生物活性与其分子结构密切相关，包括糖苷键、单糖组成、硫酸基含量和分子量等。高分子量多糖会由于水溶性较低，从而阻碍它们渗透到细胞中以执行给定的功能，而较低分子量的硫酸多糖则显示出更高的生物活性。由于活性多糖经不同方法降解得到的多糖的功能特性也不同，因此选取恰当的提取与降解方法以更大程度地提高多糖的各种生物活性是非常重要的。目前现有的羊栖菜多糖的降解方法多为氧化降解法、酸降解法，采用酶法降解羊栖菜多糖则鲜见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种新的提高羊栖菜降解多糖生物活性方法。

为了解决上述技术问题，提供一种增强羊栖菜多糖生物活性的方法(对羊栖菜粗多糖进行复合酶降解的方法)，包括以下步骤：

1)、降解：

先将羊栖菜粗多糖(SFP)溶于pH为4.5～7.0的缓冲溶液，接着加入由果胶酶和糖化酶组成的复合酶，再加入缓冲溶液进行稀释，所得的体系中羊栖菜粗多糖(SFP)的浓度为2～5 mg/mL、复合酶总浓度为20～80U/mL；所述果胶酶：糖化酶的活力比＝6:0～0:6；

将所述体系于40～65℃的温度下振荡反应1～5h，从而实现对羊栖菜粗多糖的降解；

2)、将步骤1)所得的反应液除酶(高温除酶)后过滤，所得滤液浓缩至原体积的20～30％ (即，约1/4)；用截留分子量为3500Da的透析袋透析24～48h，将所得的透析液(留在透析袋中的溶液)浓缩，冷冻干燥(-50～-60℃浓缩干燥至恒重)，得到羊栖菜复合酶解多糖(ESFP)。

作为本发明的增强羊栖菜多糖生物活性的方法的改进：

所得的体系中羊栖菜粗多糖(SFP)的浓度为4.0mg/mL、复合酶总浓度为68.4U/mL；所述果胶酶：糖化酶的活力比＝3.3:1，缓冲溶液的pH为6.0；

于54.2℃的温度下振荡反应3h；得到羊栖菜复合酶解多糖ESFP 1-1。

ESFP 1-1的分子量为86.8kDa。其与未降解的羊栖菜多糖(SFP)相比，其氧化活性、胆酸结合活性及免疫调节作用得到显著提高。

作为本发明的增强羊栖菜多糖生物活性的方法的进一步改进：

所述pH为4.5～7.0的缓冲溶液是pH为4.5～7.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液、柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液。

作为本发明的增强羊栖菜多糖生物活性的方法的进一步改进：将羊栖菜复合酶解多糖 ESFP 1-1进行分离纯化；包括以下步骤：

①、粗分：

选用Cellulose DEAE-52层析柱(规格为60cm×Φ2.6cm，有效长度为50cm)；