[发明专利]用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的AS-PCR引物及其应用

权利要求书

1.一种用于非诊断目的的鉴别Asia-I型犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的AS-PCR引物，其特征在于，所述AS-PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQID NO：1所示，所述反向引物如SEQ ID NO：2所示，所述SEQ ID NO：2的碱基r为碱基A或G。

2.一种用于非诊断目的的鉴别Asia-I型犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的AS-PCR引物。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括预混液MIX。

4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括阳性对照以及阴性对照，所述的阳性对照包括分别含有犬瘟热病毒野毒株或疫苗株H基因的质粒，所述的阴性对照为无RNA酶水。

5.一种用于非诊断目的的鉴别Asia-I型犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1、提取待测病毒株的总RNA，以提取的RNA为模板，通过逆转录反应合成cDNA，制得待测模板；

步骤2、将步骤1所得的待测模板、权利要求1所述的AS-PCR引物、预混液MIX组成的PCR反应体系进行PCR扩增；

步骤3、取 PCR产物，经琼脂糖凝胶电泳，于凝胶成像系统观察结果并判定：野毒株均为阳性，疫苗株均为阴性。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2中PCR反应体系采用50μL反应体系：10μM如SEQ ID NO：1所示的正向引物2μL，10μM如SEQ ID NO：2所示的反向引物2μL，擎科金牌预混液MIX 45μL，待测模板1μL。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2中的PCR反应条件如下：循环前98℃预变性2min，每个循环包括98℃变性10s，51℃退火10s，72℃延伸10s，共设30个循环，循环结束后于72℃延伸1min。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤3中取5μ L PCR产物，经1%琼脂糖凝胶电泳。

9.权利要求1所述的AS-PCR引物在制备用于非诊断目的的鉴别Asia-I型犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的试剂中的应用。

10.权利要求2-4任一项所述的试剂盒在制备用于非诊断目的的鉴别Asia-I型犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的试剂中的应用。