[发明专利]一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法

说明书

本发明公开了一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法。包括以下步骤：将花楸果捣碎，加入乙醇溶液超声提取，减压浓缩得花楸果粗取物；采用聚酰胺色谱柱，以乙醇为洗脱液进行梯度洗脱，减压浓缩得不同梯度馏分洗脱物；再使用高速逆流色谱对不同馏分洗脱物进行分离纯化，即分别得纯度高于95％的新绿原酸、绿原酸、槲皮素‑3‑O‑(6″‑α‑L‑鼠李糖基‑4″′‑α‑L‑鼠李糖基)‑β‑D‑葡萄糖苷、3,5‑O‑双咖啡酰基奎宁酸和芦丁。本方法工艺简单，分离速度快，产品纯度高，综合成本低，具有很好的推广使用价值。

技术领域

本发明涉及化合物的分离提纯技术领域，具体为一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法。

背景技术

百华花楸(Sorbus pohuashanensis Hedl.)为蔷薇科花楸属植物，其果实称为“花楸果”，广泛分布于我国东北和华北等地。果实可以食用，民间常以果实入药，其果味苦甘、性平，具有抗炎、镇咳、平喘、强心、抗氧化、抗癌和抗辐射等药效，是保健品、食品、药品、化妆品等重要的工业原料。现在研究表明花楸中含有丰富的多酚化合物，是其主要的活性物质。其中黄酮的含量占常见浆果之首，且其抗氧化活性(ABTS指标和DPPH指标)也都位居前列。其余的多酚成分，在清除自由基和抗氧化方面有较好的活性，同时对花楸酚类提取物稳定性考察时发现其酚类成分可有效的代替合成抗氧化剂。

百华花楸作为一种珍贵的浆果，在黑龙江省资源丰富，具有巨大的潜在研究价值，但研究和开发力度仍然不够。此外，对百华花楸中酚类和黄酮类成分的分离制备更是鲜有报道。为了更好进行花楸的药效研究，同时解决目前市场上纯品化合物资源缺乏的现状，以便尽早实现花楸果在保健品、食品、药品、化妆品等工业的应用，因此，花楸果活性成分的分离是必要的。

目前，国内外多采用柱色谱法、重结晶、制备液相的方法对化合物进行分离提纯。然而传统的柱色谱法和重结晶等方法，操作繁琐，耗时费力，重现性差，且样品损失量大。制备色谱虽然样品分离纯度较高，但成本高，分离样品量少。高速逆流色谱(High-speedcounter-current chromatography HSCCC)是一种较新的液液分配色谱技术，它不用任何固体支撑体或载体，克服了传统分离方法对样品的不可逆性吸附作用，因而样品回收率高，同时还具有仪器操作简单、应用范围广、分离量大等优点。此外，高速逆流色谱技术由于其分离机理不同于传统的高效液相色谱技术，常作为HPLC的一种强有力的补充技术而广泛应用于天然产物的分离及纯化。但目前国内外还未见有将高速逆流色谱应用于百华花楸果中多酚化合物的分离纯化。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术不足而提供一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法，可以从花楸果中同时分离出三种酚类化合物和两种黄酮类化合物。该方法具有工艺简单、操作方便、样品纯度高、生产成本低等优点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法，包括如下步骤：

1)制备提取物：由花楸果制备粗提液，减压浓缩，冷冻干燥，得花楸果粗提物；具体为：

1.1)将花楸果捣碎，按料液比1kg:5L～1kg:10L加入质量浓度为60％～90％的乙醇或甲醇水溶液超声提取，提取温度为35～45℃，提取时间为30～60min，适时搅拌，过滤，得滤液；

进一步的，将花楸果捣碎，按料液比1kg:10L，加入质量浓度为80％的乙醇水溶液超声提取，提取温度为45℃，提取时间为1h。

更进一步的，所述的花楸果来源于百华花楸。

1.2)将所得滤液，45℃下减压浓缩，冷冻干燥，得花楸果粗提物。

2)初步纯化：利用聚酰胺色谱柱对步骤1)得到的花楸果粗提物，以乙醇为洗脱液进行梯度洗脱，得到不同梯度的洗脱物；具体为：