[发明专利]一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法

权利要求书

1.一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）制备提取物：由花楸果制备粗提液，减压浓缩，冷冻干燥，得花楸果粗提物；具体包括如下步骤：

1.1）将花楸果捣碎，按料液比1 kg : 5 L～1 kg : 10 L，加入质量浓度为60%～90%的乙醇或甲醇水溶液超声提取，提取温度为35～45℃，提取时间为30～60 min，适时搅拌，过滤，得滤液；

1.2）将所得滤液，45℃下减压浓缩，冷冻干燥，得花楸果粗提物；

2）初步纯化：利用聚酰胺色谱柱对步骤1）得到的花楸果粗提物，以乙醇为洗脱液进行梯度洗脱，得到不同梯度的洗脱物；具体包括如下步骤：

2.1）将步骤1）所得花楸果粗提物溶于水中，以上样浓度15～25 mg/mL加入到聚酰胺色谱柱中，静止2～3 h，先用蒸馏水洗脱，弃去洗脱液，然后依次使用质量浓度为40～50％乙醇和质量浓度为60～70％乙醇以3 mL/min的流速进行洗脱，分别收集40～50％乙醇洗脱液和60～70％乙醇洗脱液；

2.2）分别对40～50％乙醇洗脱液和60～70％乙醇洗脱液进行减压浓缩、冷冻干燥，由40～50％乙醇洗脱液得A组分样品，由60～70％乙醇洗脱液得B组分样品；

3）分离化合物：利用高速逆流色谱对步骤2）得到的不同梯度的洗脱物进行分离纯化，得到多酚化合物，具体包括如下步骤：

3.1）将乙酸乙酯、正丁醇和水，按体积比2～4 : 0.5～2 : 4～6配成混合溶液，在分液漏斗中充分振摇后静止分层，取上层作为固定相，下层作为流动相；设置高速逆流色谱仪恒温器温度25℃，然后泵入固定相，待固定相充满高速逆流色谱柱后，调节主机转速为800～900 r/min，泵入流动相，检测波长为280 nm，流动相流速为1.5～3 mL/min；取A组分样品，按体积比1:0.5～2的固定相和流动相，混合均匀，配成浓度为5～20 mg/mL的样品溶液，进样，观察色谱峰，待目标峰出现时收集馏分，减压浓缩去除有机溶剂，冷冻干燥得新绿原酸、绿原酸、槲皮素-3-O-(6″-α-L-鼠李糖基-4'''-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷和芦丁；

3.2）将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水，按体积比0.5～1 : 2～4 : 0.5～1 : 2～4配成混合溶液，在分液漏斗中充分振摇后静止分层，取上层作为固定相，下层作为流动相；设置高速逆流色谱仪恒温器温度25℃，然后泵入固定相，待固定相充满高速逆流色谱柱后，调节主机转速为800～900 r/min，泵入流动相，检测波长为330 nm，流动相流速为1.5～3 mL/min；取B组分样品溶解于流动相中，配成浓度为5～15 mg/mL的样品溶液，进样，观察色谱峰，待目标峰出现时收集馏分，旋转浓缩去除有机溶剂，冷冻干燥得3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸。

2.根据权利要求1所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法，其特征在于，步骤3.1）中，按体积比：乙酸乙酯:正丁醇:水=3.5:1.5:5，乙酸乙酯:正丁醇:水=3.5:1:5或乙酸乙酯:正丁醇:水=3:1:5。

3.根据权利要求1所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法，其特征在于，步骤3.2）中，按体积比：正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3:1:3.5，正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3.5:1:3.5或正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=1:3:1:4。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种快速分离纯化花楸果中多酚化合物的方法，其特征在于，所述的花楸果来源于百华花楸。