[发明专利]枸杞多糖提取分离和纯化方法、枸杞糖肽及制备方法

说明书

本发明属于提取；分离；纯化技术领域，公开了一种枸杞多糖提取分离和纯化方法、枸杞糖肽及制备方法，枸杞多糖具有增强免疫力、防衰老、增强造血功能、防止遗传损伤等作用；枸杞多糖(LBP)是酸性杂多糖同多肽或蛋白质构成的的复合性多糖，且存在Glycan‑O‑Ser的糖肽结构；枸杞糖肽的抗肿瘤作用通过极其复杂的调控方式完成：诱导肿瘤细胞的凋亡表达；增强了身体对于肿瘤细胞的免疫能力。枸杞多糖能显著改善荷瘤小鼠的状况，使腹腔积液型荷瘤小鼠的生命延长41％～85％，并显著地抑制这两种实体瘤的生长，抑制率达81.0％和72.9％。

技术领域

本发明属于提取；分离；纯化技术领域，尤其涉及一种枸杞多糖提取分离和纯化方法、枸杞糖肽及制备方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：枸杞，枸杞子的性味甘、平；枸杞叶的性味为苦、甘；性凉。功能上枸杞子可以养肝，滋肾，润肺。枸杞叶具体补虚益精，清热明目的功效。而枸杞多糖是一种水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，相对分子质量为68-200；枸杞多糖是枸杞中主要有效成分之一，具有增强免疫力、防衰老、增强造血功能、防止遗传损伤等作用，大多数现有技术利用的都是枸杞多糖的粗品；目前现有工艺的提纯方法都是用传统的醇沉水提工艺，导致提纯枸杞类产品的产率不足1％，而且混合物结构复杂，并不能得到满足功效的产品。现有技术的工艺不稳定，每次得到的产品的结构均不确定，每次的测试结果千差万别，而且产率非常低；因此，对于枸杞多糖的提取分离和纯化方法以及其组成成分和结构的分析研究报道甚少。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)现有工艺的提纯方法都是用传统的醇沉水提工艺，导致提纯枸杞类产品的产率不足1％，而且混合物结构复杂，并不能得到满足功效的产品；

(2)现有技术的工艺不稳定，每次得到的产品的结构均不确定，每次的测试结果千差万别，而且产率非常低。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种枸杞多糖提取分离和纯化方法、枸杞糖肽及制备方法。

本发明是这样实现的，一种枸杞多糖提取分离和纯化方法，所述枸杞多糖提取分离和纯化方法包括以下步骤：

步骤一：收获后，枸杞果实经干燥处理，备用；

步骤二：干果碎粉用氯仿：甲醇(2:1)混合物回流，在80℃中用80％乙醇回流提取低聚糖和小分子；在特定装置装置中，用石油醚在90℃下得到低聚糖；

步骤三：在亚临界条件下，使用加压水结合超声辅助处理得到低聚糖，在100℃下用5mPa压力和26mL×g·1的液固比，在超声功率下53分钟，得到粗LBP；

步骤四：根据不同的方法对粗LBP提取物进行去蛋白处理；

步骤五：采用亲和性和反相高效液相色谱(RPHPLC)的组合对产品进行纯化，纯化后将获得的过滤浓缩的水提取物加入四体积95％乙醇，沉淀多糖组分；

步骤六：利用无水乙醇和丙酮洗涤，将过滤的粗LBP沉淀冻干并储存；

进一步，步骤二中，将超声波(80W)与纤维素酶(中温)(56℃)结合，培养时间20分钟后在进行处理

进一步，步骤四中，粗LBP提取物根据不同的方法进行去蛋白处理，如酶解、SEVAG法、或三嵌段共聚物盐双水相萃取和透析膜。

进一步，步骤五中，沉淀多糖组分，通常在4℃下过夜培养。

进一步，步骤六中，冷冻时间一般为90小时以上。

进一步，步骤六中，用无水乙醇和丙酮洗涤后，将过滤的粗LBP沉淀冻干并储存，然后用热风干燥、真空干燥和喷雾干燥进行处理粗品LBP，方法选用喷雾干燥。